[目 的]比较薄膜分散法和冻融-冻干法制备四价流感疫苗脂质体冻干粉的理化性质和免疫原性;使用最佳制备方法制备不同粒径流感疫苗脂质体,比较理化性质、免疫原性及稳定性,选择最适合的粒径。[方法]1.比较薄膜分散法和冻融-冻干法制备四价流感疫苗脂质体冻干粉的免疫原性:将昆明种小鼠分为PBS组、薄膜分散法组、冻融-冻干法组和疫苗原液组,腹腔免疫小鼠7天、14天和28天,脾淋巴细胞增殖实验（MTT法）刺激指数SI值比较细胞免疫原性,血凝抑制实验的免疫前和免疫后抗体滴度比HI为指标,比较体液免疫原性。2.比较粒径对流感疫苗脂质体冻干粉免疫原性影响研究:将昆明种小鼠分为PBS组、3.7μm组、2.0μm组、1.0μm组、0.45μm组和疫苗原液组,腹腔免疫小鼠7天、14天和28天,MTT法测定SI值比较细胞免疫原性;使用CD4+、CD8+抗体标记脾淋巴细胞,以CD4+/CD8+为指标进行免疫原性研究;通过检测HI值比较体液免疫效果。3.研究粒径对流感疫苗脂质体冻干粉稳定性影响:将脂质体制备为3.7μm、2.0μm、1.0μm、0.45μm的冻干粉和混悬液,在4℃、25±2℃（60%±5%）和40±2℃（75%±5%）下进行加速实验,包封率、HI和SI做为考察指标,比较物理稳定性和生物稳定性。[结 果]1.比较薄膜分散法和冻融-冻干法制备四价流感疫苗脂质体冻干粉的免疫原性影响研究:通过薄膜分散法和冻融-冻干法制备脂质体冻干粉,冻融冻干法制备粒径大小为3.71 μm,包封率为94.48%,薄膜分散法制备的脂质体粒径为2.82 μ m,包封率为83.43%。MTT结果:免疫7天冻融-冻干法组的SI值与其他各组均有显著性差异（P<0.05）,免疫14天和28天,薄膜法和冻融-冻干法脂质体疫苗组均高于疫苗原液组和PBS组,无显著性差异。血凝抑制实验结果:免疫7天和28天,冻融-冻干组免疫前后抗体滴度比与疫苗原液组有显著性差异。2.比较粒径对流感疫苗脂质体冻干粉免疫原性影响研究:MTT实验结果显示,免疫7天,3.7 um组SI值高于其他几组,与疫苗原液和PBS组具有显著性差异（P<0.05）,14天和28天时3.7 μm组和2.0 μm组SI值高于其他几组,无显著性差异。脾淋巴细胞表面标记实验结果,免疫7天、14天和28天,各免疫组CD4+/CD8+均高于PBS组（P<0.05）,脂质体佐剂修饰的流感疫苗组均高于疫苗原液组,无显著性差异。血凝抑制实验结果,3.7 μm组在3天、7天的免疫前后抗体滴度比HI与疫苗原液组有显著性差异（P<0.05）,在3天、7天、14天、28天、42天和56天均大于其他各组,但无显著性差异（P>0.05）,在56天所有组HI均下降,但脂质体疫苗组与疫苗原液组HI均仍大于4。3.研究粒径对流感疫苗脂质体冻干粉稳定性影响研究:物理稳定性方面,4℃、25±2℃（60%±5%）和 40±2℃（75%±5%）下 3.7 u m 组、2.0 μ m组、1.0 μm组和0.45 μ m组的脂质体冻干粉储存6个月的包封率较其混悬液高,3.7 μm组较其他几组包封率下降程度少,冻干粉在6个月下降7.94%。生物稳定性方面,4℃下保存4个月各脂质体组具有免疫原性,与PBS组有显著性差异（P<0.05）;25±2℃（60%±5%）下保存2个月,各脂质体组SI值和HI均低于4℃保存的疫苗原液组,与疫苗原液组有显著性差异（P<0.05）,但HI值仍高于4,有体液免疫原性,保存4个月时各脂质体组HI值低于4,无体液免疫原性;40±2℃（75%±5%）保存15天,各脂质体组SI和免疫前后抗体滴度比均低于4℃保存的疫苗原液组,与疫苗原液组有显著性差异（P<0.05）,3.7μm组HI等于4,其余脂质体组HI低于4,无体液免疫原性。[结论]1.选择冻融-冻干法作为四价流感疫苗的制备方法。2.3.7 μm的疫苗脂质体给药后能产生较好的体液免疫和细胞免疫应答,选择3.7 μ m作为四价流感疫苗脂质体冻干粉的粒径。3.各脂质体组4℃时储存4个月内具有免疫原性,25±2℃（60%±5%）储存2个月有免疫原性,40±2℃（75%±5%）储存15天无免疫原性。