乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）持续感染机理尚未完全清楚，目前认为与宿主免疫应答低下或形成免疫耐受，以及Th1/Th2细胞失衡等密切相关。现已知免疫应答中，T细胞表面的CD28分子与其配体B7结合，在防止形成免疫耐受方面起重要作用；白细胞介素-12（IL-12）、干扰素-γ（IFN-γ）和白细胞介素-10（IL-10）等对Th1/Th2平衡有调节作用。另外，乙肝疫苗接种者中约有5％～10％的人不能产生中和抗体（抗-HBs），其机理还不十分明确。通过了解慢性HBV感染者CD28表达及血清IL-12、IFN-γ和IL-10水平，以及探讨接种乙肝疫苗免疫失败的可能原因，有助于进一步阐明HBV感染慢性化的机制，并为慢性乙肝的预防、诊断和治疗提供一定的理论和实验依据。 第一部分：慢性HBV感染者外周血T细胞CD28表达及血清IL-12，IFN-γ和IL-10水平的研究 为了解慢性HBV感染者外周血T细胞表面CD28分子表达及血清IL-12、IFN-γ和IL-10水平与血清HBeAg、丙氨酸转移酶（ALT）水平之间的关系，探讨HBV持续感染过程中的免疫病理学特点，我们采用流式细胞测定技术（fluoresceinactivated cell sorter，FACS）和酶标双抗体夹心法（EIA），分别检测112例血清HBeAg和ALT水平不同的慢性HBV感染者外周血淋巴细胞中CD4~+、CD8~+细胞CD28分子的表达情况，及血清IL-12、IFN-γ和IL-10水平。 结果显示，HBeAg阳性/ALT正常组CD4~+CD28~+、CD28~+、CD4~+和CD8~+细胞I 浙江大学硕士学位论文D 亚群百分数（分别为 27．03％、44．42％、29．06O和 27．86o）均比正常对照组（分l 别为 34．35％，53．68％，37．37％和 33．00％）减少，差异有显著意义（均 P＜0刀1）。DHBeAg阳性／ALT异常组、HBeAg阴性／ALT异常组CD28”细胞亚群百分数（62．15％D 和 62．20o），及 CDS”CD28”细胞亚群百分数（26．69o和 26．17O）分别比对照组】（53．68％和19．33％）增高（均尸刃刀1）：CD矿T细胞上CD沈表达率比对照组增高，差异有显著意义（分另P＜0刀1，P＜0刀引；血清几一12、f：Nf：N一Y和1卜10水平D 也都比对照组增高，差异均有显著意义（均尸＜0刀1）。各组＊＊8丫＊28”细胞比对－照减少，差异均有显著意义（P＜0．of或P＜0．05）。各组 CD4”、CDS”T细胞上 CD28D 表达率均比对照组增高。l 因此我们认为，血清 HBeAg阳性及肝功能正常的 HBV慢性感染者处于细胞l 免疫应答低下或耐受状态。Thl 与仆 细胞均参与肝细胞的免疫病理损伤，ICDS”CD28”T细胞的 CTL应答起主要作用。血清 IL10水平增高是 HBV持续感l 染的重要因素之一，而 T细胞 CD28分于表达减少或 CDS＋CD28细胞增多可能均 l 不是主要原＠。临床上检测 HBV感染者外w＆ CD4“CD28”、CDS”CD28”T mm 及血清 IL刁，IFN十和 IL10水平，有助于了解其机体免疫应答水平、特点及免疫 性肝损伤程度，以指导疾病的治疗和预后。D 第二部分：乙肝疫苗抗体无应答与 B7．CD28共刺激途径及 IL12、互L10的相 l 为了从共刺激倍号B7（CD80，CD86）－CD28以及相关细胞因于方面探讨导致乙l 肝疫苗兔疫失败的机制，我们对15例乙肝疫苗兔疫成功者（应答组）和 15例免 D 疫夫败者（无应答组）分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells， PBMC），给予非特异性植物血凝素（PHA）刺激及特异性重组乙肝表而抗原D （rHBsAg）刺激，进行体外细胞培养。用流式细胞术（FACS）检测 PBMC表面 D CD80、CD86表达和 CD4”、CDS”细胞CD28表达，酶标双抗夹心法（ELISA）检 0 测培养细胞上清儿－12和 IL－10水平，四甲基偶氮哇盐（MTT）法检测培养细胞 D ZI］浙江大学硕士学位论文l 结果显示，在 PHA刺激下，PBMC表达 CD80、CD86分子的百分数，CD4＋、ICDS”细胞表达CD28分于的白分数，培养上清IL12和IL．10水平，以及PBMCl 的增殖反应等，无应答组和应答组之间差异均无显著意义（P＞005）。但经 MSAgl 刺激后，无应答组与应答组比较，PBMC表达 CD80和 CD86的百分数均减少，D 差异百显者怠义（分别P＜0刀5，尸＜0．01）；培养上清1卜12和IL．10水平均降低，l 差异有显著意义（均 P＜0刀5）；PBMC