对虾白斑综合症病毒(WSSV)膜蛋白VP13A的鉴定及VP31和VP33与宿主细胞相互作用的初步研究

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对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是一种具有囊膜、无包涵体的杆状双链环状DNA病毒,也是严重危害对虾养殖业的最主要病原。本论文围绕病毒膜蛋白开展研究,包括以下三个部分:(1)质谱分析发现病毒膜蛋白VP13A是ORF wsv284的编码产物。随后在E.coli BL-21菌株中表达纯化了GST-VP13A-His并制备了相应的抗血清。利用GST pull-down和Far-Westernblotting分析发现VP13A和另一个病毒膜蛋白VP24有相互作用。(2)WSSV的膜蛋白VP31和VP33都具有RGD序列,推测该结构域在这两种蛋白和宿主细胞的结合中起重要作用。分别可溶表达并纯化得到这两种全长蛋白以及RGD序列被RDG所替代的突变蛋白。间接免疫荧光染色和RGD竞争抑制实验显示,只有野生型蛋白能结合螯虾血细胞,而这种结合又能被含RGD序列的多肽抑制,证实了VP31和VP33对宿主细胞的粘附是由RGD结构域所介导的。(3)病毒具有自我组装的机制,一般是由ATP酶起作用,推测WSSV也有自身编码的ATP酶。利用试剂盒检测纯化的WSSV病毒粒子,发现具有微弱的ATP酶活性。以蔗糖密度梯度离心有效地分离了不同包装程度的病毒粒子,为今后研究病毒结构、装配和成熟机制提供了一些新思路。总之,对病毒膜蛋白的性质、膜蛋白之间的相互作用以及膜蛋白与宿主细胞作用机理的研究是了解病毒入侵、包装、成熟和释放的重要步骤,将为防治病毒奠定科学依据。
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