背景:CRISPR(Clustered Regularly Interspersed Short Palindromic Repeats)即规律间隔成簇短回文重复序列,它能抵御入侵的病毒和外源DNA,通过sg RNA引导Cas9核酸内切酶切割其定位的双链DNA,达到敲除的效果;ABCG2基因高表达与肿瘤多药耐药性密切相关,在癌细胞中过表达ABCG2将引起多耐药性导致治疗失败,然而却少有报道它在结直肠癌中除了多耐药性外和其他恶性生物行为的关系,本研究通过应用CRISPR-Cas9敲除ABCG2基因观察其对结直肠癌的多药耐药性和其他恶性生物行为的影响。方法:1、构建Lenti CRISPR v2载体;2、构建ABCG2敲除细胞株;3、MTT法检测稳定敲除细胞株对药物敏感性的改变;4、药物积累实验评估稳定敲除细胞株外排功能性的改变;5、通过MTT法、流式细胞术、划痕实验、Transwell侵袭实验、软琼脂糖克隆形成实验检测细胞生物行为的改变。结果:1、Lenti CRISPR v2载体构建成功;2、ABCG2稳定敲除细胞株构建成功;3、ABCG2基因敲除细胞株的药物敏感性提高;4、敲除ABCG2使结直肠癌细胞胞内药物积累增加;5、敲除ABCG2对结直肠癌细胞生长的影响不大,显著使细胞周期分布,迁移、侵袭克隆形成能力都减弱。结论:应用CRISPR-Cas9技术敲除ABCG2能抑制结直肠癌的恶性生物学行为。