第一部分、临床研究部分联合化疗在晚期头颈鳞癌中的作用　　 背景和目的：目前，不能手术晚期头颈鳞癌患者的治疗依然是头颈外科处理的难点，大部分患者其治疗多采用联合化疗或化疗加放射治疗模式，通过以上的措施有部分患者可以延缓病情。当前，对不能手术晚期头颈鳞癌患者的治疗临床上还没形成较为一个统一的意见，各医疗机构主要以各自的临床经验作为处理的依据，存在着较大的随意性。本研究目的探讨联合化疗在不能手术晚期头颈鳞癌中的作用，不同化疗方案如何选择，以及在联合化疗中应注意的问题。方法：回顾总结了1995年1月至2005年1月间我院收治的118例不能手术晚期头颈鳞癌情况，其中男性患者102例，女16例，平均年龄为53.4岁；口咽癌19例，喉咽癌47例，舌癌52例，入院时全部为初治患者，按UICC分期全部为III～IV患者；88例采用DBF方案化疗，30例采用TP方案化疗。　　 结果：118例患者中化疗评价为完全缓解CR患者有13人，占11.02％(13/118)，部分缓解PR患者47人，占39.83％(47/118)，总有效率(CR+PR)为50.85％。118例患者的生存情况：中位生存期位15月，用Log Rank方法比较不同化疗组DBF方案和TP方案的平均生存时间，卡方值为0.968，p值为0.325>0.05，无统计学意义。多因素COX模型分析表明性别、疗效和N分期是影响生存的有效因素。结论：对于不能手术晚期头颈鳞癌患者联合化疗依然能起到一定的作用，有效率可在50％以上；在选择应用PBF或TP方案时，两种不同化疗方案对生存期的影响并无差异；化疗疗效反应好的患者其预后较反应差的患者好，因此，提高晚期头颈鳞癌化疗疗效将有利于改善预后。　　 第二部分、基础研究部分PARP-1基因表达影响舌鳞癌对PBF化疗方案敏感性的分子机制　　 目的和背景：PBF(DDP、5-FU、博莱霉素)方案是目前舌鳞癌最为常用的化疗方案之一，治疗效果明确，费用低廉，广泛应用于各级医院。但PBF方案CR率仍达不到50％，不同患者、不同部位之间的疗效仍有很大的差距。所以要更好的发挥PBF方案作用，关键在于能否进一步提高其化疗疗效。大量研究已经表明DNA修复基因PARP-1的存在是导致舌鳞癌细胞对化疗敏感性下降的主要原因之一，研究DNA修复基因PARP-1调控舌鳞癌细胞化疗敏感性的分子机制，将为寻找出新的干预手段提高PBF方案的疗效，提供理论依据；也为化疗前即能确定敏感病例，实现个体化治疗，奠定基础。本研究的目的是获得PARP-1与舌癌发病和化疗敏感性的相关性方面的可靠证据，阐明PARP-1调控舌鳞癌细胞化疗敏感性的分子机制，为提高舌鳞癌细胞癌对化疗的敏感性提供更充分的科学依据。材料与方法：1、舌鳞癌病人标本共80例，阴性的手术切缘标本50例作为对照，用免疫组化方法检测PARP-1蛋白的表达，用统计学的方法了解PARP-1蛋白表达的临床意义。2、通过以下体外细胞实验来说明PARP-1在调控舌鳞癌细胞在化疗敏感性中的作用，(1)、细胞周期检测；(2)、MTT法；(3)、细胞TUNEL-FITC实验。实验将体外培养的舌鳞癌细胞TCA8113细胞(由中山大学肿瘤防治中心研究所提供)分成7组，分别为：Medrum alone(无刺激组，相当于正常对照)；siPARP-1(干扰质粒组)；5-amnio(抑制剂组)，5-Aminoisoquinoline来源：CAS1125-60-6，sigma，U.S.A；Anticancer drugper1/3IC50(5-FU+BLM+DDP)(添加化疗药物组)，抗癌药浓度(IC50):顺铂(DDP)0.59μM，5-氟尿嘧啶(5-FU)2.33μM，平阳霉素(BLM)0.176mg/ml；siPARP-1+anticancer drug(干扰质粒+化疗药物组)；5-amnio+anticancer drug(抑制剂+化疗药物组)；siCon(Empty Vector空白载体转染组)。分别进行以上三部分实验。结果：1、PARP-1在舌鳞癌及癌旁组织中的表达88例舌鳞癌中49例阳性，阳性率为61.3％，50例对照标本中12例阳性，阳性率为24％，两者差异具有显著性(X2=17.143，P<0.001)；化疗有效组32中14例阳性，无效组12例中10例阳性，两组差异有显著性(X2=5.515，P=0.019)。2、(1)细胞周期检测单纯PBF方案作用TCA8113细胞与PARP抑制剂联合PBF方案作用于TCA8113细胞，发现细胞增殖率(G2+S)％为28.1％与27.3％，明显低于其它五组，siPARP-1联合PBF方案作用于TCA8113细胞，细胞增殖率为44.7％，细胞增殖率下降程度与另4组差异并不大。(2)、MTT实验中检测不同组别不同时间检测的OD值，其中添加PARP抑制剂联合PBF方案的TCA8113细胞不同时间段受抑制情况如下：12小时OD=0.339，24小时OD=0.397，48小时OD=0.254，均明显高于其它六组，方差分析方法(ANOVE).进行球形检验(Mauchlystest of sphericiti)，得到球形检验的p=0.000，认为各个时间点的观察值的方差不齐，使用多元方差分析进行统计分析。从统计结果可知，“时间”主效应的p=0.000<0.05，有统计学意义，认为各个时间点的总体均数不同；“时间点和组别”之间的交互作用的p=0.000<0.05，有统计学意义，认为不同组别对OD值的随时间变化趋势是不同的。(3)、细胞TUNEL/Hoechst实验观察实验结果显示抑制剂(5-amnio)加PBF方案与siPARP加PBF方案组都出现大量的凋亡细胞，显著多于单纯用PBF化疗方案。结论：1、PARP-1蛋白的高表达可能是导致舌鳞癌对化疗的敏感性下降的一个重要因素；2、下调PARP-1的表达水平可以提高舌鳞癌细胞对PBF化疗方案的敏感性；3、PARP-1抑制剂能显著提高舌鳞癌细胞对PBF化疗方案的敏感性；4、PARP-1基因可能是影响舌鳞癌化疗敏感性的一个重要基因。