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本论文对鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)外膜外排基因做了以下的一些研究：RA (outer membrane efflux protein, OEP)外膜外排蛋白基因核苷酸生物学特性分析、该基因编码的蛋白生物学特性分析、外膜外排基因的T克隆及亚克隆、原核表达、重组蛋白的纯化、兔抗RA外膜外排基因多克隆抗体的制备、多克隆抗体的粗提、用实时荧光定量PCR的方法来检测RA外膜外排蛋白基因表达量与RA耐四环素的关系。结果如下：1.RA外膜外排蛋白基因生物信息学分析该基因有一个完整的ORF,其基因片段长度为1437bp,NCBI BLASTN进行序列比对发现该基因与GenBank上提交的RACH-2和RAATCC11845的外膜外排蛋白基因序列相似度最高,对RAOEP基因密码子偏嗜性分析显示该基因密码子的偏性比较弱并且没有2个以上的稀有密码子串。系统进化树分析该蛋白质与RACH-2和RAATCC11845外膜外排蛋白的亲缘关系最近,并且还属于同一分支,有信号肽,但没跨膜区,抗原表位相对集中,有4种不同的功能位点,即分别为蛋白激酶C磷酸化位点、N-豆蔻酰化位点、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点及N-糖基化位点。二级结构预测显示α螺旋占主要部分,该基因编码蛋白定位在外膜上。2.RA外膜外排蛋白基因T克隆、原核表达及多克隆抗体制备依据外膜外排蛋白基因序列设计一对合适的引物,用于PCR的扩增,其扩增出的基因片段长度为1437bp。构建重组原核表达质粒pET-32a(+)/OEP,并将其转化到大肠杆菌BL21中,用IPTG使其诱导表达,表达出一个约为64KD的融合蛋白。纯化重组蛋白,并对新西兰大白兔进行免疫,制备出多克隆抗体,即兔抗RAOEP血清,制备的血清琼扩效价为1：16,Western-Blot显示兔抗RA血清能与纯化的重组蛋白发生特异性反应。3.RA外膜外排蛋白基因表达量与不同浓度四环素的关系RA耐四环素MIC值的测定采用的是二倍稀释法的方法,其MIC值为20μg/mL 。将RA在10μg/mL的范围内进行梯度培养,提取各自的RNA,并进行反转录,用实时荧光染料定量PCR的方法对OEP基因表达量与RA耐四环素的关系进行分析,结果发现,当四环素浓度在9μg/mL范围内,OEP基因的表达量随着所培养的RA中四环素浓度的变化而呈现先上升后下降的趋势。