目的:本课题目的是提出早期制剂介入概念及开发原则,并围绕其开展研究工作,以对其进行初步验证。前期选择具有明确抗肿瘤活性的水不溶性先导化合物T-OA作为模型药物,通过早期制剂介入,制备固体分散体,实现提高药物水溶性,提高药物生物利用度的目的;并通过体外药物释放、体内药代动力学等研究,对其改善药物水溶性和体内吸收的性能进行评价;在设计固体分散体和微乳等几种早期制剂后,对不同类型的早期制剂技术的特点及改善模型药物水溶性和体内吸收的性能进行初步对比分析;最后选择一种早期制剂技术,对具有类似结构的T-DA先导化合物进行早期制剂研究;以初步验证早期制剂介入概念的可行性,通过对可引入早期制剂介入系统的制剂技术的对比分析,初步建立早期制剂介入技术体系。方法:根据早期制剂介入技术所需解决问题的特点,制定了开发三原则,所需原料药少、通用性强和简便快捷。课题研究共包含三大部分内容。第一部分,T-OA固体分散体处方工艺研究及体内外性质研究。含量测定采用高效液相色谱法进行,溶出度测定采用紫外分光光度法进行。处方研究中,依据开发三原则,首先对熔融法及其常用载体PEG 6000、PEG 4000和泊洛沙姆F 68进行了研究,然后对溶剂法进行了研究。通过对药物与载体的比例、表面活性剂的比例与加入方式、溶出介质类型等因素进行研究,优化了处方。并进一步对固体分散体进行了 X-衍射、DSC、红外光谱及电镜等体外性质研究。以SD大鼠为模型动物,建立血浆样品处理方法及其体内血药浓度的测定方法,并进行方法学验证;进行了原型药物和固体分散体的体内药代动力学对比研究;采用Kinetica 4.4软件的非房室模型对药代数据进行处理,考察固体分散体对T-OA的吸收增强程度。第二部分,T-OA微乳处方工艺研究及体内外性质研究。体内外含量测定采用高效液相色谱法进行,处方研究中,首先对多种溶媒对T-OA的溶解能力进行了对比研究以选择合适的油相、表面活性剂和助表面活性剂。通过构建伪三元相图确定了表面活性剂与助表面活性剂的最佳比例Km及优化的水包油微乳处方。对微乳进行了粘度、pH值、粒径、Zeta电位及电镜分析等体外性质研究。以SD大鼠为模型动物,进行了 T-OA油酸溶液和微乳的体内药代动力学研究;采用Kinetica 4.4软件的非房室模型对药代数据进行处理,同时与固体分散体对比考察了几种早期制剂对T-OA的吸收增强差异。最后通过体外稀释实验对体内结果进行了进一步分析。第三部分,T-DA微乳处方工艺研究及体内外性质研究。体内外含量测定采用高效液相色谱法进行。首先将T-OA微乳处方直接应用到T-DA,获得T-DA微乳I,判断其是否形成微乳。然后进行T-DA的处方研究,使用多种溶媒对T-DA的溶解能力进行了对比研究以选择合适的油相、表面活性剂和助表面活性剂。通过构建伪三元相图确定了表面活性剂与助表面活性剂的最佳比例Km,获得了优化的水包油微乳处方Ⅱ。对T-DA微乳Ⅰ和Ⅱ进行了粘度、pH值、粒径、Zeta电位及电镜分析等体外性质对比研究。以SD大鼠为模型动物,进行T-DA两个微乳处方的体内药代动力学对比研究。采用Kinetica 4.4软件的非房室模型对药代数据进行处理。初步评价早期制剂介入技术对结构类似化合物处方的适用性。结果:各制剂中T-OA的体内外含量测定均采用高效液相色谱法进行,溶出度采用紫外分光光度法进行,进行了方法学研究,各项指标均符合要求;熔融法处方研究结果显示,PEG 4000、PEG 6000和泊洛沙姆F 68均不能与T-OA形成良好的固体分散体,基于早期制剂介入的开发原则迅速予以放弃。溶剂法制备固体分散体,药物与载体的最佳比例为1:5,SDS的加入可以改善溶出的批间均一性,与药物及载体的最佳比例为1:5:0.06。T-OA原型药物在水中基本不溶出,而T-OA固体分散体在pH 4.5、pH 6.8及水介质中溶出均可在10 min内达到90%,但在pH 1.0溶出介质中溶出度较低,且迅速下降,提示未来制剂需设计成肠溶固体分散体制剂。固体分散体的DSC结果表明固体分散体中药物的晶型发生了变化;X-衍射结果表明药物在固体分散体中以非晶态存在;红外光谱表明固体分散体中药物的羟基和羰基可能与载体有物理化学作用;电镜结果表明固体分散体中药物的晶体形态消失,同时SDS内加制备固体分散体的过程中可能具有抑晶作用。体内药代动力学研究结果表明,固体分散体的生物利用度提高到原型药物的4倍。通过T-OA溶解度研究选取了油酸作为油相,吐温80为表面活性剂,无水乙醇为助表面活性剂。伪三元相图确定了表面活性剂与助表面活性剂的最佳比例Km为3:7。在兼顾低表面活性剂用量和高载药量的条件下制备了 T-OA水包油微乳。微乳的载药量达到了 20 mg/mL,粒径为 70nm,粘度为 15.57 mpa·s,电导率为 44.1 μS·cm-1,Zeta电位为-0.174 mV。电镜结果表明形成了水包油微乳,粒径与马尔文测定一致。T-OA微乳的体内药代动力学结果表明,生物利用度较原型药物提高了 57倍,较固体分散体提高了 14倍。同样,制得的T-OA油酸溶液早期制剂体内生物利用度也较固体分散体有显著提高。因此,补充了固体分散体和微乳的体外稀释实验以分析原因。研究结果表明,固体分散体在稀释过程中溶出下降很快,4 h内从11.6%下降到了 1.0%,说明药物在稀释过程中结晶,从而影响了药物体内吸收。而微乳制剂药物浓度不断上升,6 h内从4.3%上升到了 9.3%,并不断升高,到48 h始终维持在12.8%左右的较高水平。因而推测在微乳和油酸溶液两种早期制剂中,药物在体内更易于保持分子状态,因此有利于提高药物的体内吸收。以T-DA为模型药物进行早期制剂介入概念的初步验证。按T-OA微乳处方直接制备T-DA微乳Ⅰ。通过T-DA溶解度研究选取了油酸作为油相,吐温80为表面活性剂,异丙醇为助表面活性剂。伪三元相图确定了表面活性剂与助表面活性剂的最佳比例Km为4:6。在兼顾低表面活性剂用量和高载水量的条件下制备了 T-DA水包油微乳Ⅱ。将T-DA微乳Ⅰ和微乳Ⅱ进行对比,两者均制备了 TDA浓度为50 mg/mL的水包油透明微乳。T-DA Ⅰ由油酸/吐温80/无水乙醇/水组成,质量比为0.20/0.16/0.38/0.26;T-DAⅡ由油酸/吐温80/异丙醇/水组成,质量比为0.12/0.20/0.30/0.38。T-DAⅠ的粒径、粘度、电导率、pH值和 Zeta 电位分别为 50nm,2.80 mpa·s,43.8 · cm-1,4.91和-0.147 mV;T-DA Ⅱ的粒径、粘度、电导率、pH值和Zeta电位分别为76 nm,2.80 mpa·s,75.2μS.cm-1,5.21和-0.144 mV。两者的体外性质相近。大鼠体内药代动力学实验结果表明,两者的Tmax,Cmax,t1/2,MRT和AUC均无显著性差异。结论:T-OA的微乳处方可以直接应用于T-DA本身就是EPDC的成功应用。T-DA微乳处方研究得到的优化处方Ⅱ与按T-OA微乳处方直接制备的T-DA微乳Ⅰ相比,两者的体内外性质无明显差异,进一步表明早期制剂介入技术建立的T-OA处方可以适用于类似结构化合物T-DA。本研究达到了预期目标,初步验证了早期制剂介入概念的可行性,说明早期制剂介入技术体系对结构性质类似的化合物具有一定的处方工艺通用性。T-OA固体分散体、微乳及油酸溶液三种早期制剂均可提高药物的体外溶解性能和体内生物利用度。固体分散体体内生物利用度为原型药物的4倍;微乳体内生物利用度为原型药物的57倍,为固体分散体的14倍。三项技术均符合早期制剂介入概念的技术要求,可以作为早期制剂介入技术体系的组成部分。本研究初步建立了早期制剂介入技术体系。