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桃流胶病是我国桃树上最严重的病害之一,主要是由病原菌Botryosphaeria dothidea,B.rhodina和B.obtuse引起的,目前针对桃流胶病的防治策略以化学防治为主,农业防治为辅,但化学农药的使用不仅会使病原菌产生抗药性,而且造成环境污染,危害人体健康,生物防治因其绿色环保、安全可靠而受到广泛关注。本试验从桃树根组织中分离并筛选出了一株对桃流胶病病原菌具有拮抗作用的内生细菌,结合形态观察与分子手段对其进行鉴定,并对菌株进行GFP标记,研究其在植物体内的定殖情况,另外初步探讨了该菌株的生防机制,主要研究结果如下:1.从桃树根茎叶部位共分离到内生细菌129株,其中有20株对桃流胶病病原菌B.dothidea XNHG-241具有拮抗作用,选取拮抗作用较好的一株菌株HAR3进行鉴定,通过16S rRNA和gyrB基因序列构建系统发育树并结合形态观察将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌。2.构建了含egfp片段的质粒pUBXCP,通过接合转移的方法将质粒转入解淀粉芽孢杆菌HAR3,得到菌株HAR3-GFP。标记菌株能够表达强烈的荧光,并能稳定遗传,且菌株HAR3-GFP与野生型菌株HAR3对B.dothidea XNHG-241的抑制作用没有显著性差异。3.HAR3的抗真菌谱试验结果表明,HAR3不仅对造成桃流胶病的B.rhodina,B.dothidea和B.obtusa具有拮抗作用,对Botrytis cinerea,Monilinia fructicola,Colletotrichum higginsianum,Penicillium digitatum和Geotrichum citri-aurantii等多种病原菌也具有拮抗作用,但对Rhizopus stolonifer没有拮抗作用。4.采用灌根的方法用HAR3-GFP菌悬液处理植株,取番茄和拟南芥幼苗根部制作切片,置于激光共聚焦显微镜下拍照观察,发现接种1 d和3 d后,有大量的HAR3-GFP定殖在根表和根毛区,5 d后只能观察到少量的菌落定殖。对桃幼苗采用组织再分离和稀释涂布平板的方法,在接种10 d,30 d,100 d后从桃树根茎叶部位均能分离到HAR3-GFP,表明HAR3-GFP能够在桃树体内定殖,并能通过根部扩展到茎叶部。5.对桃枝条喷施HAR3菌液后立刻接种病原菌B.rhodina JMB-122,接种5 d后,处理组枝条病斑为4.36 mm,相比对照组降低了32.8%。对于流胶情况,处理组无胶体的流出,而对照组流胶率达到了75%。另外,对枝条喷施HAR3菌液24 h后,再接种病原菌,对照组枝条在第5 d病斑为5.16 mm,流胶率达到了25%,而处理组枝条在第5 d病斑为0.65 mm,相比对照组降低了87.4%,未发生流胶。6.经三氯甲烷:甲醇(65:15)萃取菌株HAR3发酵上清液,制备发酵液粗提物,当在培养基中加入0.5625%的发酵液粗提物就能完全抑制B.dothidea XNHG-241的生长。同时从HAR3中扩增出了8个不同的脂肽生物合成基因,包括可以合成杆菌霉素的bamD基因,合成杆菌溶素的bacD,bacAB基因,合成伊枯草菌素的ituD,ituA,ipa 14,ituC基因,合成抗霉枯草菌素的fenF基因。