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目的：探讨利用多次皮下注射胰岛素方法建立糖尿病大鼠血糖波动模型,并初步观察血糖波动对糖尿病慢性并发症的影响。方法：取75只SD大鼠随机分成正常组(n=20)和模型组(n=55),高糖高脂饲料喂养模型组SD大鼠4周后用小剂量链尿佐菌素(STZ)35mg/Kg腹腔注射诱导建立糖尿病模型,模型成功后将其随机分成持续高血糖组和血糖波动组。血糖波动组大鼠每日2次皮下注射胰岛素诱导血糖波动,建立糖尿病大鼠血糖波动模型。观察各组大鼠存活率、体重、饮水量、尿量情况及检测血糖值、胰岛素、HbAlC,肾功能与24小时尿蛋白、血脂等生化指标变化。结果：1.持续高血糖组,血糖波动组较正常组大鼠存活率、体重显著下降,饮水量和尿量显著增多(P<0.05),而持续组与波动组无显著差异(P>0.05)。2.与正常组相比,糖尿病模型组大鼠空腹血糖、血清胰岛素均显著升高,胰岛素敏感性指数下降(P<0.05)。3.持续高血糖组与血糖波动组大鼠的平均血糖水平(MBG)、每日平均血糖的标准差(SDBG)与每日最大血糖波动幅度(LAGE)及M值较正常组均显著增高(P<0.05),血糖波动组的SDBG, LAGE及M值显著高于持续高血糖组,持续高血糖组的MBG显著高于血糖波动组(P<0.05)。4.与正常组比较,血糖波动组和持续高血糖组大鼠的24小时尿蛋白,血清BUN、Cr显著增高(P<0.05),且波动组较持续组上述指标显著增高(P<0.05)。5.与正常组比较,血糖波动组和持续高血组大鼠HbAlc显著增高(P<0.05),且波动组与持续组比较无显著差异(P>0.05)。持续组、波动组与正常组比较,血脂指标TC、TG、LDL显著升高(P<0.05),HDL显著下降(P<0.05),持续组和波动组比较无显著差异(P>0.05)。结论：使用每日皮下注射两次胰岛素的方法能成功制作出糖尿病大鼠血糖波动模型,并可作为研究血糖波动及其并发症的动物模型。HbAlC相似的糖尿病大鼠,血糖波动可能加重其糖尿病并发症的发生发展。目的：观察血糖波动对糖尿病大鼠主动脉内皮依赖性舒张功能(EDVR)和一氧化氮(NO)含量、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性和表达及磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B (PKB,亦称Akt)表达的影响。方法：观察各组大鼠离体主动脉对乙酰胆碱(Ach)依赖性血管舒张反应,Griess重氮化反应法检测主动脉NO含量,免疫组化SP法检测eNOS活性,透射电镜检测主动脉超微结构的变化,RT-PCR及western blot方法检测PI3K、PKB、eNOS mRNA及蛋白的表达。结果：1.持续高血糖组与血糖波动组大鼠胸主动脉对各浓度点乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张功能(EDVR)较正常对照组均显著下降(P<0.01),而波动组上述指标又低于持续组(P<0.05)。持续组与波动组大鼠主动脉NO浓度均较正常组显著下降(P<0.05),且波动组较持续组下降(P<0.05)。2.持续高血糖组与血糖波动组糖尿病大鼠主动脉透射电镜检查可见内皮细胞和内皮下结构的病理改变。血糖波动组较持续高糖组病理改变更加严重。3.正常组大鼠主动脉eNOS阳性表达主要出现在血管内膜区(主要是内皮细胞胞质),持续组和波动组主动脉eNOS阳性表达较正常组显著下降(P<0.05)。4.血糖波动组与持续高血糖组PI3KmRNA与PI3K-P85蛋白,PKB、eNOS磷酸化蛋白相对光密度值较正常组均显著低,且波动组较持续组显著下降(P<0.05)；波动组,持续组大鼠主动脉PKB、eNOS mRNA及PKB、eNOS,总蛋白相对光密度值与正常组比较无显著差异(P>0.05)结论：长期血糖波动可以加重糖尿病大鼠血管内皮依赖性舒张功能的损伤及内皮细胞超微结构破坏,可能通过抑制糖尿病大鼠主动脉PI3K/Akt/eNOS信号通路的活化,减少内皮舒张因子NO的合成,从而加重糖尿病大血管病变。目的：观察波动性高糖培养对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)合成舒张因子一氧化氮(NO)浓度和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(PKB)表达的影响,探讨血糖波动影响内皮功能的信号转导机制。方法：波动性高浓度葡萄糖(5.5或20mmol/L)与恒定性高浓度葡萄糖(20mmol/L)作用于人脐静脉内皮细胞(HUVECs)7天,检测上清液NO浓度及Western blot方法检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B (PKB/Akt)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白及磷酸化蛋白的表达水平。结果：1.波动性高糖组,持续性高糖组HUVCE上清液中NO浓度较正常组显著降低(P<0.05),而波动性高糖组显著低于持续性高糖组(P<0.05)。2.波动性高糖组与持续性高糖组PI3K-P85蛋白相对光密度值较正常组显著下降(P<0.05),且波动组较持续组下降更显著(P<0.05)。波动性高糖组,持续性高糖组Akt, eNOS,总蛋白相对光密度值较正常组无显著差异。波动性高糖组,持续性高糖组Akt, eNOS磷酸化蛋白相对光密度值较正常组显著降低(P<0.05),而波动组上述指标又低于持续组(P<0.05)。结论：波动性高糖较持续性高糖对人脐静脉内皮细胞可能具有更强的损伤效应,并可能通过影响信号通路PI3K/Akt/eNOS导致内皮细胞NO合成减少。