【摘 要】
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目的观察携带靶向HIF-2α基因的shRNA的2型重组腺相关病毒对体外培养的人胰腺癌细胞增殖、凋亡作用及其对化疗药物健择的增敏作用。方法将rAAV2-EGFP-U6- HIF-2α-siRNA转染
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目的观察携带靶向HIF-2α基因的shRNA的2型重组腺相关病毒对体外培养的人胰腺癌细胞增殖、凋亡作用及其对化疗药物健择的增敏作用。方法将rAAV2-EGFP-U6- HIF-2α-siRNA转染入人胰腺癌细胞株PANC-1中,以绿色荧光蛋白(GFP)基因为报告基因,用荧光显微镜和流式细胞仪观察病毒转染效率。分别在常氧和缺氧条件下培养细胞,用逆转录聚合酶连反应、免疫细胞化学法检测PANC-1细胞HIF-2αmRNA和蛋白表达,MTT法检测不同浓度的化疗药物健择对PANC-1细胞的增殖抑制作用,MTT法检测缺氧条件下rAAV2-EGFP- U6-HIF-2α-siRNA联合化疗药物健择对PANC-1细胞增殖能力的影响, Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡。结果rAAV2-EGFP-U6-HIF-2α-siRNA被成功地转染入PANC-1细胞中,FCM测定转染效率在40%左右。与阴性对照组和空白对照组比较,实验组PANC-1细胞的HIF-2αmRNA和蛋白的表达明显受到抑制。不同浓度的健择(0.25μg/mL -4μg/mL)作用48小时后均对细胞增殖有抑制作用,并随剂量的增加抑制率逐渐增大(F=859.054,P<0.05),相同药物浓度下,常氧下的细胞抑制率大于缺氧条件下的细胞抑制率(F=219.471,P<0.05)。在缺氧状态下,联合组对PANC-1细胞的生长抑制率显著高于单纯转染组和单用健择组,差异均有统计学意义(F=39.279,P<0.05),且联合组PANC-1细胞凋亡率最高(P<0.05)。结论rAAV2-EGFP-U6-HIF-2α-siRNA转染PANC-1细胞后能降低PANC-1细胞株HIF-2αmRNA及蛋白的表达,抑制PANC-1细胞株增殖,促进细胞凋亡并能提高PANC-1细胞株对化疗药物健择的敏感性。
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