蛋白酶(protease)是一类水解酶,是最主要酶制剂之一,广泛应用于各领域,目前商品化的固体蛋白酶存在着耐温性很差的问题,无法应用于需高温制粒的饲料中,而液体蛋白酶由于外界条件(高温高湿等)的限制,运输过程中的储存稳定性存在着很大的问题,主要表现为长途运输中胀气、高温条件下酶活急剧下降、存放时间过长导致酶制剂酶活性下降、出现浑浊现象等。本研究希望通过添加防腐剂、表面活性剂、抗氧化剂等来提高液体蛋白酶的稳定性,改善液体蛋白酶外观。(1)本文比较了国家检测标准中蛋白酶的福林法和紫外法两种检测方法。结果证实,福林法适用于单酶蛋白酶和含有蛋白酶的复合酶制剂,紫外法适用于单酶蛋白酶酶制剂。本实验的其他内容均使用紫外法检测蛋白酶活性。(2)本实验中,黑曲霉和宇佐美曲霉产的酸性蛋白酶,最适作用pH均为2.5,最适作用温度均为55℃;As1.398枯草芽孢杆菌产的中性蛋白酶最适作用pH为7.5,最适作用温度为50℃。(3)黑曲霉液体酸性蛋白酶最适保存pH为4.0~5.0,合适的保护剂为15%~20%甘油和4%氯化钠。宇佐美曲霉液体酸性蛋白酶最适保存pH为4.0~5.0,合适的保护剂需继续研究寻找。为满足生产和销售需求,建议使用黑曲霉菌种产酸性蛋白酶。As1.398枯草芽孢杆菌产的中性蛋白酶最适保存pH为6.0~7.0,最适的保护剂为20%甘油。(4)本实验主要以钠离子、钙离子和磷离子三种离子为研究对象,探讨对蛋白酶活性的影响。实验结果为:以磷酸二氢钙化合物存在的磷离子浓度为0.275%对中性蛋白酶无影响,浓度为2.75%时有抑制作用;以氯化钠化合物存在的钠离子浓度为0.55%及5.5%时和以碳酸氢二钙化合物存在的钙盐浓度为0.75%及7.5%时,均对中性蛋白酶有抑制作用。三种离子对酸性蛋白酶无激活作用,也无抑制作用。