PCR-DGGE技术分析不同废水活性污泥中的微生物菌落结构

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研究生物处理废水工艺中微生物群落结构多样性,对于研究生化反应的机理、污染物降解和转化途径有非常重要的意义。目前,DGGE技术广泛应用于环境微生物群体多样性的研究和微生物群体动态的研究方向上,并与其他分子生态学技术结合,将微生物生态学、尤其是环境微生物学的研究引入了新的阶段。基于16SrDNA的PCR-DGGE(polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis)技术被广泛用来分析活性污泥中微生物多样性。本论文应用PCR-DGGE技术研究了倒置A~2/O(anoxic - anaerobic– aerobic)工艺处理染织废水过程中的微生物群落结构变化、SBR(Sequencing Batch Reactor Activated Sludge Process)工艺处理酶制剂废水过程中微生物群落结构变化、SBR工艺处红霉素废水过程中微生物群落结构变化。首先,测定三种废水样品处理不同阶段生理生化性质指标:pH、COD、TP(总磷)、硫化氢含量、氨含量、色度变化规律。结果显示,三种废水样品整个处理过程中pH变化波动较大,COD、TP(总磷)、硫化氢含量、氨含量和色度五个指标呈逐渐下降的趋势。染织废水、酶制剂废水和红霉素废水三种样品处理后期,pH分别变为7.68、7.53和7.38; COD分别降为145mg/L、253 mg/L和232 mg/L; TP含量分别降为2.083 mg/L、6.21 mg/L和6.20 mg/L;氨氮含量分别降为13.87 mg/L、58.05 mg/L和61.12 mg/L;硫化氢含量分别降为1.33 mg/L、0.52 mg/L和0.46 mg/L;色度分别降为124倍、145倍和323倍。三种废水样品样品DGGE电泳图谱显示了微生物的多样性分布,染织废水样品好氧处理阶段微生物比厌氧处理阶段丰富;酶制剂废水样品是厌氧处理初期阶段时微生物菌群最丰富;红霉素废水是随着处理的进行微生物丰富度逐渐升高。通过比较不同阶段处理样品的相似性,发现厌氧处理和好氧处理两种完全不同的处理阶段样品相似性最低,相邻的处理阶段相似性相对来说较高,处理阶段相隔越远的阶段相似性一般越低。根据DGGE图谱及条带强度示意图,选择信号较强的条带,测序。测序结果为:Bacillus subtilis、uncultured bacteria、Pseudomonas putida、Pseudomonas sp.SH12、Uncultured bacterium、Pseudomonas alcaligenes、Uncultured bacterium gene、Pseudomonas mendocina、Magneto spirillum sp、beta proteobacterium、Uncultured bacterium、Acinetobacter lwoff ii、Flavobacterium、Uncultured bacterium、Beta proteobacterium NA 10B gene、Thiobacillus sp.、Uncultured eubacterium clone、Thiobacillus denitrificans。分别对每个样品中选择的6种细菌及所有的18种细菌建立系统发育树,分析了细菌间相近性。
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