高良姜是姜科植物的干燥根茎,具有温胃散寒,消食止痛的功效。本文对高良姜的主要化学成分、药理作用及痛风的研究进展进行了综述,为本课题开展高良姜活性部位抗痛风实验奠定了文献基础。首先,将高良姜分别进行水提和醇提,再将醇提物依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行系统溶剂萃取。通过灌胃黄嘌呤和腹腔注射氧嗪酸钾建立小鼠高尿酸血症模型,检测血清中尿酸值,初步筛选高良姜的降尿酸活性部位。研究结果表明,高良姜正丁醇萃取部位能显著降低小鼠血清尿酸水平,之后依次是醇提物、母液和水提物,其它部位也有一定降尿酸作用。这些结果表明高良姜中可能存在较强的醇溶性和水溶性降尿酸活性成分,特别是水提物中主要含有多糖和挥发油;而正丁醇部位,则含有大量的黄酮苷类成分。因此拟进一步对这些部位开展提取纯化和活性筛选研究。第二,采用水蒸气蒸馏法提取高良姜挥发油,用挥发油得率作为考察指标,选取料液比、粉碎度、浸泡时间、提取时间等4个对挥发油提取影响较大的因素进行单因素试验考察,筛选出最佳提取工艺。实验结果表明24目的高良姜粉末在料液比1∶12(g/mL)、浸泡1 h、提取5 h的条件下提取得率最高,达到0.071mL/g。再通过水提醇沉法提取高良姜多糖,采用苯酚-硫酸法测定含量,并以提取率和含量作为考察指标,选取料液比、提取温度、提取时间等三个方面进行单因素和正交试验。最终确定高良多糖提取工艺的最佳条件为料液比1∶45(g/mL)、提取温度100℃、提取时间2.5 h。在此条件下,高良姜多糖的含量和得率分别达到了39.83%和52.71%。选用乙醇加热回流提取高良姜总黄酮,以高良姜素作为对照品,建立紫外分光光度法测定高良姜总黄酮含量的方法,以总黄酮的得率和含量作为考察指标,通过单因素和正交试验,优选最佳提取工艺条件,同时采用高效液相色谱法测定高良姜素纯度并进行了方法学验证。最终优选了高良姜总黄酮的最佳提取工艺条件为料液比1∶6(g/mL)、提取温度60℃、提取时间1.5 h、乙醇浓度85%,在该条件下高良姜总黄酮的得率可达到14.69%,纯度可达到22.69%,同时高良姜素纯度可达到5.21%。根据静态吸附实验考察了不同型号的大孔树脂,筛选出AB-8大孔树脂,再通过动态实验对饱和吸附量、上样液pH值、洗脱溶剂浓度等条件进行考察,确定从醇提物中高效分离纯化高良姜总黄酮的方法。研究结果表明,最佳工艺条件为上样液pH=5,动态饱和吸附量为2.5 g/g、80%乙醇洗脱。AB-8大孔树脂联用聚酰胺树脂纯化高良姜总黄酮时,纯度可达96.93%,得率为66.28%。第三,采用小鼠高尿酸血症模型,考察水提物、醇提物、总黄酮、挥发油和多糖对小鼠血清中的尿酸、肌酐、尿素氮水平的影响。研究结果表明,高良姜醇提物和总黄酮都能有效降低小鼠血清中的尿酸值和尿素氮值;挥发油高剂量组可以降低尿酸值;水提物能降低肌酐值和尿素氮值,多糖组也能降低肌酐值。第四,小鼠踝关节注射尿酸钠晶体(MSU)建立痛风性关节炎模型,考察石油醚,二氯甲烷,乙酸乙酯,正丁醇等高良姜不同萃取部位对C57小鼠的足趾肿胀容积、双足平衡差异、血清中IL-1β和TNF-α蛋白水平的影响。结果显示,各给药组均能不同程度地缓解关节肿胀和疼痛,并且能降低血清中IL-1β和TNF-α的含量,且正丁醇部位的效果最为明显。同样往小鼠踝关节注射MSU建立痛风性关节炎模型,考察高良姜不同纯度的总黄酮对小鼠足趾肿胀容积、双足平衡差异、血清中IL-1β和TNF-α蛋白水平的影响,同时观察关节HE染色病理组织切片。结果发现,各给药组均能不同程度地降低小鼠足趾肿胀度或双足承重差异值,同时降低小鼠血清中IL-1β和TNF-α浓度。除低剂量组外,其它组的关节炎症情况均有不同程度地减轻,其中AB-8高剂量组和醇提组效果最好。第五,采用小鼠背部气囊注射MSU建立气囊炎性模型,考察高良姜不同化合物对小鼠气囊灌洗液中白细胞数、IL-1β和TNF-α蛋白水平的影响,同时观察气囊皮肤HE染色和巨噬细胞F480、中性粒白细胞MPO的免疫组织化学染色。结果发现,高良姜中部分化合物能不同程度地抑制炎症因子TNF-α和IL-1β的水平,降低白细胞数;同时能有效抑制小鼠气囊囊壁增厚,减少血管增生和纤维化,改善炎症反应。综上所述,高良姜的总黄酮部位对高尿酸血症和痛风性关节炎均有较明显的改善作用,具有开发成抗痛风药物的良好潜力。