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哈维氏弧菌（vibrio harveyi）是一种发光弧菌,尤其在虾中最常见。已感染哈维氏弧菌的虾一旦不能得到及时处理,虾经常会出现体表肌肉不同程度的充血溃烂并且某些部位在黑暗处可以发光,喂养一段时间后会死亡,给养殖业带来巨大的损失。因此,为养殖户和监管部门建立可监测哈维氏弧菌的方法很重要。目前,哈维氏弧菌的检测方法主要包括传统培养基培养法、免疫学分析法和分子生物学法三种。哈维氏弧菌传统培养法存在耗时长、操作琐屑等问题。现有应用较为普遍的哈维氏弧菌免疫学分析法以酶联免疫吸附法和免疫纸层析技术为主,其中胶体金标记层析试纸条法操作简便,反应仅需十几分钟,适合现场检测,但是其灵敏性较低,以定性和半定量为主,因此有必要研究更为灵敏的,并且可准确定量的哈维氏弧菌免疫层析检测方法。分子生物学方法中,LAMP（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification）法和RAA（Recombinase Aided Amplification）法属于恒温扩增,可以使用简单恒温设备即可进行病原菌的扩增,方法简单,不需使用像PCR仪这类变温设备,极大地降低了检测条件。为研发适合于现场监测哈维氏弧菌和实验室快速鉴别哈维氏弧菌的方法,本文首先研究了基于磁性免疫层析试纸条检测哈维氏弧菌的方法,通过优化抗体偶联量和层析液添加比例,建立了哈维氏弧菌磁性免疫层析检纸条的制备工艺;为提高试纸条的检测灵敏度,进一步对C线和T线的抗体包被浓度进行了优化,从而建立了适合于现场检测的磁性免疫层析试纸条的制备方法,并对其准确性、灵敏度、特异性等检测性能进行评价。其次,本文根据分子生物学相关原理,通过对检测时间、引物筛选等检测过程的优化,建立了LAMP和RAA检测哈维氏弧菌的方法,并对其准确性、灵敏度、特异性进行评价。主要结果如下:1.以甲醛灭活的哈维氏弧菌ATCC 33842为灭活抗原,对新西兰大白兔进行免疫,制备获得效价大于1:80000的哈维氏弧菌多克隆抗体,ELISA分析发现该抗体仅对哈维氏弧菌有特异性反应。将自制的哈维氏弧菌多抗偶联到磁性纳米材料表面,利用双抗夹心法原理构建哈维氏弧菌磁性免疫层析试纸条。通过优化磁珠偶联抗体量、C线与T线包被抗体浓度、试纸条层析体系,得到1 mg磁珠偶联抗体量为140μg,C线与T线浓度均为2 mg/mL,Tween-20含量为10%（V/V）,BSA浓度为0.2 mg/mL,BS缓冲液pH为9时,试纸条检测效果最佳,建立了基于磁性纳米层析试纸条检测哈维氏弧菌的方法。哈维氏弧菌磁性免疫层析试纸条定性灵敏度为1×103 CFU/mL,定量灵敏度为5×102 CFU/mL,既能定性也能准确定量检测,且两种检测限均在哈维氏弧菌死亡致病限以内,与现有胶体金试纸条相比灵敏度提高100倍以上,检测时间1020分钟,操作简便,适合于现场检测。2.依据LAMP引物设计原则合成5套不同引物,通过优化扩增温度与引物,建立在60℃恒温扩增的LAMP检测哈维氏弧菌的方法。通过特异性评价,发现本研究构建的LAMP方法仅对不同来源的哈维氏弧菌有反应,表现出良好的特异性。该法检测限7.55 copies/μL,比传统PCR法检测灵敏度高出104倍,检测时间为60分钟。通过自主设计RAA引物与探针,通过不同引物之间的组合筛选出最佳引物,对建立的RAA检测方法进行了特异性与灵敏度评价,发现该方法特异性良好,检测限为7.55×10-1 copies/μL,灵敏度比PCR高出105倍,检测时间为20分钟,是较好的快速检测哈维氏弧菌的方法。大大缩短了检测时间,比较适合于常规实验室快速鉴别与筛查哈维氏弧菌。综上所述,本文分别在免疫学和分子生物学两方面的基础上研究哈维氏弧菌的快速检测方法,建立了比较适合于现场检测哈维氏弧菌的磁性免疫层析试纸条的方法,建立了比较适合于常规实验室快速鉴别和筛查哈维氏弧菌的LAMP和RAA方法。这三种检测方法均缩短了哈维氏弧菌的检测时间,达到快速、高效地检测效果。