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本研究主要评价研制的猪细小病毒弱毒苗的免疫原性及在猪体的组织分布。选择PPV-BQ连续传代致弱的毒株免疫接种后备母猪和仔猪,试验选PPV阴性的11月龄母猪和30~40日龄的仔猪,随机分为2组,即健康对照组和免疫接种组。免疫组于第0d肌肉注射接种PPV-BQ弱毒株(TCID50=104.5/mL)的10倍稀释液10mL,健康对照纽接种DMEM细胞培养液10mL。在0、7、14、21、28、35、42d采集血液并分离血清,-20℃保存。分别在试验第7、21、42d处死仔猪,母猪于免疫接种后第10d配种,于免疫后第35d处死,收集主要脏器,-20℃保存。血凝抑制、ELISA、病毒中和抗体试验检测抗体的变化水平;WST-8方法检测脾淋巴细胞增殖情况;PCR检测前21d的病毒血症情况;血凝试验检测脏器的病毒分布情况。主要脏器制成病理切片HE染色,观察猪体的组织病理学变化。根据PPV-VP2基因设计了一对特异性引物,建立了检测PPV的实时荧光定量PCR方法,对该毒株在后备母猪和仔猪的体内组织的病毒载量进行测定。结果如下:
1.临床症状及剖检结果显示,对照组无临床症状和病理变化,免疫组母猪和仔猪无临床症状和无可见的病理损伤。
2.抗体变化水平显示,对照组抗体水平一直处于阴性状态,母猪在免疫后7d产生保护性抗体,一直持续到试验结束;免疫组仔猪抗体水平较低,没有达到保护性抗体水平。淋巴细胞增殖试验结果显示,病毒性刺激可使免疫组猪体脾淋巴细胞增殖水平显著提高,对照组淋巴细胞在特异性刺激时不能产生明显增殖。
3.组织免疫形态学检测结果显示,对照组母猪和仔猪各脏器均未发现明显的免疫形态学损伤;免疫组母猪和仔猪的子宫未发现明显的免疫形态学损伤,其它组织有轻微损伤。
4.病毒组织分布结果显示,对照组母猪及仔猪脏器中均未检出PPV病毒。免疫组母猪心脏和子宫中检出PPV病毒,免疫组仔猪在心脏、脾脏和肾脏中检出了PPV病毒。
本试验探讨了PPV-BQ弱毒株接种后备母猪及仔猪的免疫原性,为猪细小病毒病弱毒株的后续研究奠定了基础。