汉坦病毒核蛋白基因疫苗在小鼠体内表达动力学的初步研究 目的 肾综合症出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)是一种由汉坦病毒引起的急性病毒性传染病,起病急、症状重、病死率高,且目前尚无有效的治疗手段。因此,做好汉坦病毒的预防工作具有重要的现实意义。近年来,随着分子生物学的迅速发展,核酸疫苗作为一种新生物技术的出现为我们防治HFRS提供了新的思路,其相对于传统疫苗具有无可比拟的优势,代表者未来疫苗的发展方向。目前,已有研究者成功构建了若干亚型的汉坦病毒核酸疫苗,但研究重点更多的集中在核酸疫苗的免疫效果上,对于其在机体内的动力学研究相对较少。因此,本实验构建了含有汉坦病毒76-118株编码核蛋白(Neucleoprotein,NP)S抗原基因片段的核酸疫苗,研究其在体外真核细胞中的表达,肌肉接种后在小鼠体内组织分布及持续表达时间,进而探讨汉坦病毒核酸疫苗的应用前景。 本实验以此为目的,进行了以下研究:(1)以质粒pEGFP-C1为载体,质粒pTargeT/S中含有的S抗原基因片段为目的基因,构建GFP-NP融合蛋白真核表达重组质粒pEGFP/S;(2)脂质体体外转染Vero-E6细胞,观察重组质粒pEGFP/S在真核细胞中的表达;(3)免疫接种小鼠胫前肌,观察pEGFP/S在小鼠体内的组织分布及持续表达时间。 方法 一、汉坦病毒S基因真核表达重组体的构建 使用限制性内切酶EcoRI、Sa1 Ⅰ消化质粒pTargeT/S,纯化得到S基因片断,克隆至同样经EcoRI、Sa1 I消化的质粒pEGFP-C1上相应位点,酶切鉴定,得到重组质粒pEGFP/S。使用超纯质粒中提试剂盒提取质粒,-