论文部分内容阅读
第一部分PGC-1a在多发性骨髓瘤中的表达及其对细胞增殖能力的影响目的：检测过氧化物酶体增殖物受体共激活因子-1α(peroxisome proliferator activate d receptor γ coactivator-la, PGC-1a)在多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)中的表达,并研究PGC-1a对MM细胞增殖能力的影响。方法：收集RPMI8226、U266细胞、正常人外周血B淋巴细胞和MM患者临床标本,RT-PCR法检测MM细胞和临床标本中PGC-1α和ERR-a的表达情况；PGC-1α小干扰RNA (Small interfering RNA, siRNA)处理RPMI8226细胞,Western blotting检测PGC-la蛋白表达情况,CCK-8检测细胞增殖活力变化。结果：RPMI8226细胞中PGC-1a和ERR-a mRNA的表达量显著高于正常对照,U266细胞中PGC-la mRNA的表达量低于正常对照；约55.6%MM患者临床标本中PGC-1a mRNA表达量增高；Western blotting检测细胞中PGC-la表达水平,发现siPGC-1a处理后的细胞中PGC-la表达量降低；CCK-8法检测细胞增殖情况时观察到,siPGC-la处理后的RPMI8226细胞增殖受到抑制。结论：PGC-1a在MM细胞及临床标本中高表达,这种高表达可能具有促进MM细胞增殖的作用。第二部分PGC-la促进多发性骨髓瘤细胞增殖的机制研究目的：通过体外干扰PGC-la的表达,研究PGC-1a促进MM细胞增殖的相关机制。方法：siRNA干扰RPMI8226细胞中PGC-la表达,RT-PCR法检测PGC-1α、ERR-α、 VEGF和GLUT-4的表达；Western blotting检测PGC-la、ERR-a及GLUT-4的蛋白表达;Transwell小室试验观察干扰MM细胞中PGC-la的表达后,对血管内皮细胞迁移能力的影响；CCK-8检测RPMI8226细胞增殖活力。结果：siPGC-la处理RPMI8226细胞后,细胞中PGC-1α、VEGF和GLUT-4mRNA水平降低,western blotting结果显示PGC-la、ERR-a及GLUT-4蛋白水平显著降低(p<0.05)；内皮细胞迁移试验结果表明抑制RPMI8226细胞中PGC-1a的表达后,对内皮细胞的募集能力受到抑制；siERR-a处理细胞后,RPMI8226细胞在24h和48h时的增殖受到不同程度的影响。结论：PGC-1a通过诱导VEGF和GLUT-4的表达从而影响MM细胞增殖能力,从而有可能参与MM的代谢及血管新生过程。第三部分调控PGC-1α改变多发性骨髓瘤细胞对化疗药物的敏感性目的：通过siRNA调控PGC-1α的表达,研究PGC-1α是否影响MM细胞对化疗药物的敏感性。方法：硼替佐米处理MM RPMI8226细胞后,RT-PCR检测细胞中PGC-1α、SOD-2、GPX-1表达；Western blotting法检测RPMI8226细胞中PGC-1α的表达；siRNA干扰PGC-1α后采用流式细胞仪检测硼替佐米对MM细胞中活性氧类物质(ROS)及凋亡水平的影响；MTT法和CCK-8法检测细胞增殖活力。结果：MTT及CCK-8结果表明siRNA干扰PGC-1a后,硼替佐米对RPMI8226细胞的增殖抑制能力显著增强；RT-PCR及Western blotting结果表明RPMI8226细胞接受硼替佐米处理后,PGC-la的表达量显著增高,SOD-2、GPX-1的表达在硼替佐米处理后同样增高；使用siRNA干扰PGC-1a表达后,RPMI8226细胞中PGC-la、SOD-2、GPX-1的表达量降低,流式细胞仪结果显示siRNA干扰组中ROS水平明显高于对照组,凋亡水平亦明显高于对照组。结论：PGC-1a能通过诱导SOD-2、GPX-1的表达,降低细胞内ROS水平,影响MM细胞对化疗药物的敏感性,抑制PGC-1a的表达能增强化疗药物对MM细胞的促凋亡作用。