细胞基因组时刻遭受着来自内外因素的损伤威胁,如果这些损伤无法得到及时、准确的修复,将会导致基因组的不稳定,甚至是细胞死亡与肿瘤发生。为了应对各种不同的DNA损伤,机体演化出了一系列精细的应对机制,包括细胞周期阻遏、损伤修复,以及其他细胞信号通路。参与这一系列应对机制的蛋白功能的发挥往往依赖于蛋白翻译后修饰信号的调控,如磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化、苏素化等。泛素化修饰是很多参与DNA损伤修复蛋白发挥功能的重要调控手段之一。蛋白泛素化修饰信号通过E1激活酶、E2结合酶和E3连接酶的信号传递和层叠而完成。目前在人类中,已有大约500余种的泛素连接酶被定义。为了发现更多未知的蛋白,我们克隆了300余种E3连接酶的cDNA。以53BP1在电离辐射损伤诱导下的foci作为检测标志物,利用免疫荧光实验手段,筛选可能影响53BP1招募的E3连接酶。在此次筛选中,我们找到了许多已经报道的参与到DNA损伤修复通路的E3连接酶(如RNF4、RNF8、RNF168、PSO4等),说明此筛选方法具有可行性,也暗示着很有可能存在未报道过的E3。最后我们筛选到了几个可能参与DNA损伤修复信号通路的蛋白,并对其进行了初步的验证与分析。