【摘 要】
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目的:结合细胞实验,探究铁死亡在TOCP诱发神经细胞毒性中的作用和机制。方法:1.以人成神经母瘤SK-N-SH细胞为研究模型,经梯度浓度TOCP染毒48h或经铁死亡抑制剂DFO（100μM）、Fer-1（10μM）预处理6 h后再经TOCP（0.75 m M）处理48 h,CCK-8检测细胞活性;2.采用流式细胞术结合倒置荧光显微镜检测TOCP染毒后SK-N-SH细胞中脂质过氧化状况及线粒体膜电位
【基金项目】
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国家自然科学基金项目:自噬在三邻甲苯基磷酸酯诱发的神经毒性中的作用（81172712）； 国家自然科学基金项目:钙信号转导在三邻甲苯基磷酸酯影响神经细胞自噬中的作用及机制（81673227）；
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目的:结合细胞实验,探究铁死亡在TOCP诱发神经细胞毒性中的作用和机制。方法:1.以人成神经母瘤SK-N-SH细胞为研究模型,经梯度浓度TOCP染毒48h或经铁死亡抑制剂DFO（100μM）、Fer-1（10μM）预处理6 h后再经TOCP（0.75 m M）处理48 h,CCK-8检测细胞活性;2.采用流式细胞术结合倒置荧光显微镜检测TOCP染毒后SK-N-SH细胞中脂质过氧化状况及线粒体膜电位;3.利用荧光分光光度计检测TOCP处理后SK-N-SH细胞中MDA含量,微孔板酶标法测定SOD、GSH-GSSG含量;4.Western Blot结合免疫荧光检测SLC7A11、GPX4、ACSL4、FTH1、NCOA4、LC3 II/I、P62等蛋白表达;5.采用Giemsa染色观察TOCP处理后细胞形态,透射电子显微镜观察细胞及线粒体超微结构。结果:1.相比于对照组,铁死亡抑制剂DFO（100μM）、Fer-1（10μM）能够阻止TOCP诱导的SK-N-SH细胞活性降低;2.TOCP暴露能够使SK-N-SH细胞形态改变,胞质收缩,胞核减小,损伤线粒体形态和功能,造成线粒体皱缩变圆、嵴消失或减少、电子致密团块形成、膜破裂及线粒体膜电位降低;3.TOCP能够诱导SK-N-SH细胞发生脂质过氧化,使SOD、GSH/GSSG比例降低,MDA含量升高,铁死亡抑制剂DFO（100μM）、Fer-1（10μM）预处理能够减轻其脂质过氧化程度;4、TOCP暴露后能产生大量ROS并攻击膜上的PUFAs,使PUFAs发生脂质过氧化,同时TOCP能够激活ACSL4,合成更多的PUFAs,促进SK-N-SH细胞脂质过氧化物的形成,铁死亡抑制剂DFO（100μM）、Fer-1（10μM）预处理能够减少ACSL4的表达;5、TOCP激活NCOA4和P62,促使FTH1与LC3II结合并转移至自噬体和溶酶体,发生铁蛋白自噬降解,释放出储存的亚铁离子破坏SK-N-SH细胞铁稳态平衡,加剧细胞内氧化应激和脂质过氧化,铁死亡抑制剂DFO（100μM）、Fer-1（10μM）预处理能够减轻铁蛋白自噬;6、TOCP通过抑制SLC7A11表达阻碍x CT转运胱氨酸,使合成GSH和GPX4原料不足,引起GPX4清除脂质过氧化物的能力下降,导致SK-N-SH细胞发生铁死亡,铁死亡抑制剂DFO（100μM）、Fer-1（10μM）预处理能够抑制该趋势。结论:TOCP可通过促进铁蛋白自噬途径诱发SK-N-SH细胞铁死亡。
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