enJSRV及IFN-τ在妊娠早期蒙古绵羊生殖器官中的表达研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wyh
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内源性反转录病毒(endogenous retrovirus, ERV)在数百万年前整合到哺乳动物基因组中,它的显著特征是在大多数真核生物种系中作为遗传物质通过生殖道传播。绵羊基因组中包含约27拷贝的内源性绵羊肺腺瘤逆转录病毒(endogenous jaagsiekte sheep retrovirus, enJSRV)序列,但enJSRV在绵羊妊娠早期胚胎发育过程中的作用仍不明确。本试验利用电化学发光法测定妊娠早期蒙古绵羊第2、8、10、12、14、16、19、25和30d血清中孕酮的含量;同时以上述时期的蒙古绵羊子宫内膜、宫颈、输卵管、阴道上皮组织为材料,提取其总RNA,根据GenBank中登录的绵羊enJSRV及IFN-T序列设计特异性的引物和探针,经RT-PCR扩增,采用TaqMan实时荧光定量PCR技术检测enJSRV及IFN-τ mRNA在以上各组织中的相对表达量,就妊娠绵羊生殖组织enJSRV及IFN-τ的表达与血清中孕酮水平之间的关系进行了研究。电化学发光法结果显示,孕酮水平在妊娠第2d为0.4ng·mL-1,以后升高,妊娠第8~16d维持在8.3ng·mL"1左右,在妊娠第19~30d孕酮水平有所下降,第30d为2.5ng·mL-1。 RT-PCR结果提示,enJSRV在蒙古绵羊子宫内膜、宫颈、输卵管、阴道上皮中均出现了单一的条带,而IFN-τ只在子宫内膜上出现单一条带,且该片段与GenBank中登录的绵羊enJSRV和IFN-τ序列的同源性分别达94.9%和96.3%。实时荧光定量PCR结果显示,enJSRV在妊娠早期(第2、8、10、12、14、16、19、25和30d)不同组织间均有表达,而IFN-τ mRNA只表达于子宫内膜组织。SAS统计学软件分析得出,子宫内膜组织中enJSRV mRNA在妊娠第12-14d的表达较高,第2~10、16~30d的表达均低于前者,IFN-τ mRNA仅在妊娠的第12~25d表达,第14d达其峰值,第30d就不能检出;子宫颈组织中enJSRV mRNA在妊娠的第10d表达量最低,之后升高,第30d达到最大表达量;输卵管组织中enJSRV mRNA的表达于妊娠第10d较低,之后升高,第25d表达量最高;阴道上皮组织中enJSRV mRNA于妊娠第10d和19d的表达量相对较高,第30d的表达量较低,且差异都极显著(P<0.01)。以上结果提示,enJSRV mRNA的表达在子宫内膜、子宫颈、输卵管和阴道上皮被检测到,说明enJSRV在母羊生殖道上皮细胞大量且特异性表达。子宫内膜组织中enJSRV mRNA的表达与外周血孕酮含量及IFN-τ的变化呈正相关,为研究enJSRV在绵羊妊娠早期可能发挥的生殖生物学作用提供了理论数据。
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