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目的利用鼠杂交瘤技术筛选和制备治疗性CD19单克隆抗体,并探讨基于获得的CD19 scFv序列构建的CD19-CAR(pCD19-CAR)是否能特异性杀伤CD19阳性B细胞淋巴瘤细胞。方法利用偶联多肽免疫小鼠制备CD19单克隆抗体,然后用基因测序的方法获得抗体的序列。分析抗体序列,并通过基因合成和分子克隆技术构建pCD19片段,而后将pCD19片段克隆到带有CAR的慢病毒载体(PG1-CAR-pCDH)上,即pCD19-CAR-pCDH。病毒包装制备后,将其转染NK-92MI细胞。最后用流式细胞术检测被pCD19-CAR-pCDH瞬时转染的NK-92MI细胞对CD19阳性细胞株的杀伤率。结果(1)成功筛出了特异性强的CD19单克隆抗体—pCD19;(2)用抗体检测CD19阳性细胞株Ramos和Raji,结果显示Ramos的阳性率为84.3%,Raji的阳性率为85.6%,与商业化抗体结果相似;(3)杀伤结果显示未被基因修饰的NK-92MI细胞对CD19阳性细胞株Ramos和Raji细胞的基础杀伤效率分别为27.6%和21.8%;被pCD19-CAR片段瞬时转染的、pCD19-CAR阳性率为28.72%的NK-92MI细胞对上述两种细胞的杀伤效率分别为48.6%和44.1%;对于CD19阴性细胞株Jurkat,不论是未被基因修饰的NK-92MI或者是被pCD19-CAR片段修饰过的NK-92MI,几乎不存在特异性杀伤,杀伤效率分别为15.5%和17.8%。结论成功筛选出了具有高度特异性的CD19单克隆抗体,并利用其scFv序列成功构建了pCD19-CAR。经过pCD19-CAR片段修饰的NK-92MI细胞对CD19阳性细胞株的杀伤明显高于未被基因修饰过的NK-92MI细胞,说明被pCD19-CAR修饰过的NK-92MI细胞能特异性的识别CD19抗原并杀伤CD19阳性的肿瘤细胞株,显示出其在对CD19阳性的B细胞淋巴瘤的免疫治疗中的潜力。