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【目的】探讨肝细胞癌肝移植患者鉴定肿瘤克隆起源的临床及病理意义。【方法】收集2005年08月-2010年08月于我院经肝移植治疗的符合UCSF标准的多结节型肝细胞癌(HCC)患者的病理资料、术前血清AFP水平及术后随访资料,上述资料不完整的患者予以剔除,共收集患者60例。对60例患者的各自非肿瘤组织及全部肿瘤组织的石蜡包埋块进行切片,切片数量为5张,厚10μm,常规二甲苯-乙醇法脱蜡备用。在显微切割显微镜下,精确选择脱蜡切片的肿瘤及非肿瘤组织,利用石蜡组织DNA提取试剂盒提取肿瘤及非肿瘤组织的基因组DNA。选取12个高频肝细胞癌微卫星杂合性缺失(LOH)位点,合成引物后采用SSCP-PCR法检测癌组织发生LOH的状态,根据每例患者不同微卫星位点发生LOH的情况,判定患者的肿瘤克隆起源方式。采用SPSS20.0统计软件分析患者肿瘤克隆起源方式与肝移植术后无瘤生存率、病理学特征及血清AFP水平之间的相关性。收集2004年08月-2010年11月于我院经肝移植治疗的14例弥漫型肝细胞癌(D-HCC)患者。在14例患者切除的病肝上分别于肝脏左右叶内采集肿瘤间隔≥3cm的肿瘤灶各2块和非肿瘤肝脏组织1块。各自非肿瘤组织及全部肿瘤组织的石蜡包埋块进行切片,切片数量为5张,厚10μm,常规二甲苯-乙醇法脱蜡备用。在显微切割显微镜下,精确选择脱蜡切片的肿瘤及非肿瘤组织,利用石蜡组织DNA提取试剂盒提取肿瘤及非肿瘤组织的基因组DNA。选取12个高频肝细胞癌微卫星杂合性缺失(LOH)位点,合成引物后采用SSCP-PCR法检测癌组织发生LOH的状态,根据每例患者不同微卫星位点发生LOH的情况,判定患者的肿瘤克隆起源方式。收集14例D-HCC患者术前血清AFP浓度、术后病肝病理资料、术后随访资料,总结D-HCC的临床及病理特征。【结果】60例多结节HCC患者中,男性53例,女性7例;年龄在38岁至71岁之间,平均为53岁。患者肝病背景包括乙肝肝硬化45例、丙肝肝硬化11例、酒精性肝硬化3例、隐源性肝硬化1例。有2个肿瘤结节的患者45例,有3个肿瘤结节患者15例。60例多结节HCC患者共采集肿瘤结节135个,直径0.8cm-3.8cm。微卫星LOH检测判定肿瘤克隆起源分型为IM型、IM型+MO型、MO型和不能判定分型4种类型,分别占33.33%(20/60)、8.34%(5/60)、55%(33/60)和3.33%(2/60),肿瘤克隆起源分型不能判定的2例患者剔除,剩余58例患者分为IM组、MO组和IM+MO组,分别占34.48%(20/58)、56.90%(33/58)和8.62%(5/58)。IM组、MO组和IM+MO组的3年累积无瘤生存率、镜下癌栓发生率、肿瘤低分化率(Ⅲ级-Ⅳ级)及AFP中位浓度分别为:50.00%、78.79%和40%,100%、18.18%和100%,80%、51.52%和80%,226.80μg/L(2.78μg/L-3000.00μg/L)、24.59μg/L(1.16μg/L-531.30μg/L)和122.58μg/L(16.20μg/L-1055.00μg/L)。IM组和MO组术前血清AFP水平ROC曲线下面积为0.792,其95%置信区间(CI)为0.659-0.926,最佳判定界值为122.30μg/L,灵敏度为0.750,特异度为0.818。统计显示IM组患者的3年累积无瘤生存率明显低于MO组患者(P<0.05);镜下癌栓发生率和术前血清AFP浓度明显高于MO组患者(P<0.05),IM组患者肿瘤病理分化程度明显低于MO组患者(P<0.05),IM+MO组的无瘤生存率、肿瘤分化程度及镜下癌栓发生率均与IM组无明显差异(P>0.05)。14例D-HCC患者的LOH检测结果显示,11例患者肿瘤克隆起源分型为IM,3例患者肿瘤克隆起源分型为MO和IM同时存在。14例患者术前血清AFP浓度0.53μg/L-427.04μg/L,9例患者AFP>20.00μg/L,其中4例患者AFP>200.00μg/L。术前影像学检查显示,患者肝脏的影像学表现类似肝硬化,伴肝脏及脾脏不同程度增大,但未发现占位性病变。肿瘤分布于全肝,直径0.1-1.0cm,数量>100个,类似肝硬化结节。肿瘤病理分级为Ⅰ级-Ⅱ级,所有D-HCC均可检见镜下癌栓。肝移植术后无瘤生存时间为4.5-37.4个月,平均为13.5±6.7月。【结论】1.多结节型HCC的肿瘤克隆起源有两种主要形式:MO型与IM型;MO型在肝移植术后3年无瘤生存率明显高于IM型,而混合型(IM+MO型)预后与IM型相近。肿瘤克隆起源方式或可作为预测多结节HCC肝移植术后肿瘤复发风险的重要参考指标。2.综合肿瘤克隆起源方式、组织病理学特征及术前血清AFP水平等肿瘤学要素,有助于预测肝移植术后肿瘤复发的风险。3.D-HCC克隆起源分型以IM为主,多预示广泛的肝内转移;D-HCC发病隐匿,临床及影像学检查敏感性低,疑诊或鉴别困难时,宜借助肝脏组织穿刺活检明确诊断。