番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,ToMV)是一类世界性分布的植物病毒,其寄主范围很广,能侵染茄科、十字花科等许多植物,番茄是其主要寄主。在新疆许多地区加工番茄上番茄病毒病普遍大面积发生,症状十分复杂,有的地块发病率高达100%,造成产量下降。近年来,该病在新疆为害明显上升,并有逐年加重的趋势,严重影响了加工番茄的产量和品质。番茄花叶病毒(ToMV)属烟草花叶病毒属,其基因组为单链正义RNA,至少编码4个蛋白：130/180kDa复制酶蛋白、30kDa移动蛋白(MP)和17kDa外壳蛋白(CP)。复制酶是由进入细胞的基因组RNA直接翻译而成,而CP和MP是在病毒复制过程中产生的亚基因组翻译生成。其复制酶蛋白在病毒的复制中起主要作用,MP主要参与病毒在细胞间的运输,而CP在病毒的长距离运输中起到重要作用。本研究通过使用RNAi技术,降解靶基因mRNA,抑制ToMV内源靶基因的表达,从而达到抗ToMV的目的。首先从表现花叶、畸形的新疆加工番茄病株上检测ToMV。其经分离纯化后,根据已知生物信息学数据,从GenBank序列号：AF395128序列设计ToMV扩增引物,通过RT-PCR技术扩增其基因组,从而得到ToMV分离物CJ-2,然后将所测得的CJ-2分离物与国内外已报道的部分ToMV序列用Vector NTI软件比对分析,其核苷酸和氨基酸序列相似性都高达98.8%以上。根据保守区选择干扰序列并设计引物,利用PCR技术分别从ToMV基因组130/180kDa复制酶蛋白和17kDa外壳蛋白编码区扩增出干扰序列,将其正向和反向插入到pBi35SG12质粒中,构建了pBi35STo5, pBi35SToBK, pBi35ToMV3三个RNAi表达载体,三个重组质粒通过利用农杆菌介导法转化烟草,经不定芽诱导、生根培养,获得转基因烟草植株。转基因烟草植株经卡那霉素筛选、PCR检测,表明目的基因已整合到烟草基因组中,从而为下一步的攻毒试验奠定了基础。