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本研究通过对融安金柑花粉母细胞减数分裂行为及2n花粉自然发生率的研究,拟找出诱导2n花粉的最佳时期及适宜方法,同时研究不同倍性花粉萌发机制、对融安金柑种子进行秋水仙素诱导进行研究以及金柑种子胚性进行观察研究,对提高2n花粉的诱变率及多倍体的培育具有重要意义,为金柑倍性育种和种质创新提供理论参考。主要研究结果如下:
1、融安金柑花粉母细胞分裂行为与花蕾直径大小及外部形态具有相关性
经对不同发育时期的花蕾形态与花粉母细胞减数分裂时期的观察,结果显示:当花蕾直径为0.126~0.186cm,为花粉母细胞时期,即未进行减数分裂时期,当花蕾直径为0.216~0.246cm时,为花粉母细胞分裂前期。当花蕾直径为0.238~0.250cm,为花粉母细胞分裂中后期,当花蕾直径为0.256~0.268cm,为花粉母细胞分裂四分体期,当花蕾直径为0.294~0.350cm,花粉母细胞成为单个花粉粒,成熟花粉粒为金黄色。花药颜色由乳白色逐渐变为浅黄色、黄色及金黄色。
2、通过测量成熟融安金柑花粉粒直径大小,发现融安金柑2n花粉自然发生率为0.31%
3、不同浓度秋水仙素诱导融安金柑2n花粉效果
经试验结果得知,用秋水仙素处理融安金柑花蕾获得2n花粉的最佳时期是在融安金柑花粉减数分裂前期(即花蕾直径为0.216~0.246cm时),此时处理可产生染色体加倍的核。通过用0.15%、0.30%、0.45%、0.60%浓度的秋水仙素分别处理2d、4d、6d后,发现在低浓度时产生2n花粉发生率比自然状态下有所提高,当处理浓度为0.60%,反而出现2n花粉率偏低现象,同时有枝条枯萎现象。本次对融安金柑花粉的诱导试验表明,运用0.3%秋水仙素处理4d,2n花粉发生率达到0.67%,相对于自然情况下提高了约12倍,是较好的处理浓度和时间。
4、2n花粉与n花粉萌发率比较
通过对融安金柑花粉萌发动态观察,发现2n花粉萌发较n花粉迟晚3h,花粉管生长速度也较慢。
5、不同浓度秋水仙素处理融安金柑种子诱导效果
融安金柑种子对秋水仙素敏感,低浓度(0.1%)浸渍2d诱导效果最好,多倍体诱导率高达15%。随着浸渍浓度的提高,诱导效果反而下降。主要是由于浸渍浓度上升,对种子毒害增大,甚至导致死亡。
6、融安金柑体细胞染色体数
通过对融安金柑根尖染色体的研究发现,取样时间在室温25℃~28℃条件下,上午8:00~9:00,下午15:00~15:30是观察金柑根尖染色体数目的最佳时期。染色剂以改良卡宝品红染色效果最好,用1mol/L HCL解离时间4~6min为宜。融安金柑染色体数为2n=2x=18。