论文部分内容阅读
第一部分早期营养过度对大鼠脂肪组织血管紧张素转换酶(ACE、ACE2)表达的影响目的:研究早期营养程序化对子代脂肪组织血管紧张素转化酶表达的性别二态性及肥胖的影响,并探讨营养程序化结局的机制及性别差异性。方法:(1)雌性SD大鼠怀孕后随机分为两组,分别给予高脂饲料或标准饲料,直至所生幼鼠断奶。孕期及哺乳期均给予高脂饲料母鼠所生幼鼠即为围生期高脂饮食组,而孕期及哺乳期均给予标准饲料母鼠所生幼鼠即为围生期正常饮食组。(2)幼鼠生后21天,做糖耐量试验;处死后用放射免疫法检测血清胰岛素水平,用酶法测定血糖、甘油三酯、胆固醇水平。(3)分离后腹膜及皮下脂肪组织,用Real-time PCR和Western blot分别测定其中血管紧张素酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)、血管紧张素酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)m RNA及蛋白表达水平。结果:(1)围生期高脂饮食子代大鼠体重(p<0.05)、脂肪组织重量(p<0.001)均较正常饮食子代大鼠增加。(2)围生期高脂饮食的公鼠在3周龄时血糖、胰岛素、甘油三酯、胆固醇的浓度与正常饮食的公鼠无统计学差异(p>0.05),但糖耐量试验激发后血糖水平明显高于正常饮食的公鼠(p<0.05)。两组母鼠间血糖、胰岛素、甘油三酯、胆固醇及糖耐量试验后血糖水平无明显统计学差异(p>0.05)。(3)围生期高脂饮食的子代公鼠后腹膜脂肪组织ACE、ACE2 m RNA及蛋白表达均高于正常饮食的公鼠(p<0.05);而两组子代公鼠皮下脂肪组织的ACE、ACE2的m RNA及蛋白表达则没有统计学差异(p>0.05)。(4)围生期高脂饮食的子代母鼠后腹膜脂肪组织ACE m RNA及蛋白表达与正常饮食的母鼠无统计学差异(p>0.05),但ACE2 m RNA及蛋白表达明显高于正常饮食组(p<0.05);两组子代母鼠皮下脂肪组织的ACE、ACE2 m RNA及蛋白表达则亦没有统计学差异(p>0.05)。结论:(1)围生期高脂饮食可导致雄性子代及雌性子代均发生肥胖,但雄性个体比雌性个体会发生更严重的营养程序化的不良结局。(2)脂肪组织中ACEs表达模式存在性别差异性,并可能参与营养程序化不同结局的发生。(3)围生期高脂饮食可导致雄性及雌性个体内脏脂肪组织肾素-血管紧张素系统(reninangiotensin system,RAS)降解的代偿性增加,从而发挥一定的保护作用。第二部分系统生物学方法整合分析肥胖与血管内皮功能障碍相关基因及信号通路的构建目的:以系统生物学方法整合分析肥胖与血管内皮功能相关的基因,并构建可能的生物信息通路,探讨肥胖在心血管疾病的损害机制,进一步说明系统生物学在临床研究中的意义。方法:以“polymorphism”,“gene”,“genetic”,“allele”,“genotype”,”genetics”,”genome”与“endothelial function”,“endothelium”和“obesity”,“adiposis”,“adipositas”,“adiposity”,“fat”等为相关检索语言,在Pubmed数据库中检索相关文献,提取有统计学意义的基因。用STRING分析这些基因编码的蛋白之间联系;用DAVID软件在基因功能、信息通路等方面对基因进行功能注释;用Gene Go Meta Core进行富集分析并构建生物信息通路。结果:在Pubmed数据库中检索得到142个相关基因。STRING结果显示这些基因所编码的蛋白质联系密切,其中AGT、ACE、ACE2、AGTR1、AGTR2等与其余蛋白联系较为密切。DAVID结果显示这些基因与糖尿病、脂代谢、胆固醇代谢等有关。Gene Go Meta Core富集到与肥胖和心血管内皮功能相关的RAS信号通路。结论:(1)首次利用系统生物学方法,富集得到蛋白质折叠和成熟-RAS信号通路在肥胖与心血管疾病中起着重要的联系;(2)RAS通路可作为预防和治疗肥胖与心血管疾病的靶标。