论文部分内容阅读
目的：观察丹参酮ⅡA对人脐静脉内皮细胞的血管新生作用，并探讨其可能机制。方法：体外培养人脐静脉内皮EA.hy926细胞，常规培养于37℃、5%CO2含10%灭活胎牛血清的DMEM培养液中，细胞融合90%时进行传代，每2-3天传代一次，将处于对数生长期的（2-4代）细胞用于实验。首先应用MTT比色法观察不同浓度梯度丹参酮ⅡA促进细胞增殖情况并选择合适浓度及培养时间进一步实验。培养细胞分为空白对照组（只加培养液）、低剂量丹参酮ⅡA组、中剂量丹参酮ⅡA组、高剂量丹参酮ⅡA组、阳性对照组（加入碱性成纤维细胞生长因子bFGF）。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞上清液血管内皮生长因子（VEGF）含量，逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）实时荧光定量检测VEGF mRNA表达量，免疫印迹法（Western-blot）检测细胞中血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）蛋白的含量。结果：1.0-10mg/mL范围内丹参酮ⅡA均可促进EA.hy926细胞增殖，尤以5.0mg/mL促增殖作用最明显（P＜0.05），但培养24h与48h差异不明显，故后续试验均培养24h，浓度设置为低剂量丹参酮ⅡA组（1.0mg/mL）、中剂量丹参酮ⅡA组（2.0mg/mL）、高剂量丹参酮ⅡA组（5.0mg/mL）。与空白对照组比较，高剂量丹参酮ⅡA组和阳性对照组细胞中VEGF mRNA升高，VEGF蛋白水平也有增加，细胞VEGFR-2蛋白含量增加（P﹤0.05）。结论：丹参酮ⅡA可促进EA.hy926细胞增殖。在一定范围内，随着丹参酮ⅡA浓度升高，促增值效应增加，但达到一临界值时可能抑制细胞增殖。丹参酮ⅡA能显著影响EA.hy926细胞VEGF/VEGFR-2的表达，这可能是其促血管新生的分子机制之一。