【摘 要】
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研究目的:探讨角质细胞生长因子(KGF)是否对紫外线(UV)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激损伤具有保护作用,并解析其分子机制。研究方法和内容:我们应用免疫印迹和实时
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研究目的:探讨角质细胞生长因子(KGF)是否对紫外线(UV)诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激损伤具有保护作用,并解析其分子机制。研究方法和内容:我们应用免疫印迹和实时定量PCR方法检测人RPE细胞中是否有角质细胞生长因子受体(KGFR)m RNA和蛋白的表达;我们用角质细胞生长因子(KGF)预处理后,给予RPE细胞紫外线(UV)辐射,观察细胞存活率及凋亡情况;在RPE细胞中添加KGF,运用蛋白印迹和实时定量PCR等方法检测下游Nrf2及Akt-mTORC1通路活化情况;通过sh RNA或丝氨酸40位点突变抑制核转录相关因子2(Nrf2)通路的活化,观察对KGF作用的影响;通过添加RAD001和LY294002阻断KGF诱导的Akt-mTORC1通路的活化;观察阻断Akt-mTORC1及Nrf2通路后KGF诱导的RPE细胞保护作用的变化。研究结果:(1)人RPE细胞中表达KGFR m RNA和蛋白;(2)KGF预处理抑制UV诱导的RPE细胞存活率下降;(3)KGF预处理抑制UV诱导的RPE细胞凋亡及非凋亡性死亡;(4)RPE细胞中,KGF激活Nrf2信号通路;(5)KGF预处理抑制UV诱导RPE细胞氧化应激损伤;(6)Nrf2 sh RNA或丝氨酸40位点突变抑制KGF诱导的Nrf2活化;(7)Nrf2 sh RNA或丝氨酸40位点突变阻断KGF诱导的RPE细胞保护作用;(8)Akt-mTORC1介导KGF诱导的Nrf2活化及RPE细胞保护作用。研究结论:KGF激活Akt-mTORC1依赖的Nrf2通路拮抗RPE细胞氧化应激损伤
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