基于何成诗教授运用中药治疗肺癌的用药规律研究白花蛇舌草对A549肺癌干细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

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本研究分为两个部分,第一部分为临床研究,收集导师何成诗教授于成都中医药大学附属医院门诊诊治的肺癌患者的中药处方,统计导师常用药的使用频次及频率,并分析其临床用药规律,总结导师运用中医药治疗肺癌的临床经验。第二部分为实验研究,在临床研究的基础上选用使用频率较高且目前中药实验研究已证实具有抗癌作用的中药白花蛇舌草,将其作用于A549肺癌干细胞,研究其对肺癌干细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,探索中医药治疗肺癌的机制。  研究目的  1.根据导师治疗肺癌的临床用药,探讨导师运用中医药治疗肺癌的临床用药规律。  2.研究白花蛇舌草对肺癌干细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。  研究方法  1.收集导师从2014年10月到2016年10月期间导师门诊肺癌患者的中药处方,统计常用药的使用频次及频率,分析导师治疗肺癌的常用药物及处方规律;  2.将肺癌A549细胞常规培养后取对数生长期的细胞用肺癌干细胞培养基诱导形成肺癌干细胞球,并检测肺癌干细胞球CD133的阳性率;  3.用CCK8检测白花蛇舌草水提物干预分选好的A549肺癌干细胞24h、48h、72h后细胞的OD值,计算出细胞活力,观察白花蛇舌草作用后对细胞增殖能力的影响;  4.用流式细胞仪检测白花蛇舌草干预后A549肺癌干细胞的凋亡细胞数,计算细胞凋亡率,观察白花蛇舌草对肺癌干细胞凋亡的影响;  5.用流式细胞仪检测白花蛇舌草干预后的A549肺癌干细胞的细胞周期分布,观察白花蛇舌草对肺癌干细胞周期的影响。  研究结果  1.何成诗教授在运用中药治疗肺癌时常用清热解毒类、扶正固本类、化痰祛湿类、活血化瘀类、消肿散结类等中药,其中使用最多的是清热解毒类,而清热解毒类中使用频率最高的是白花蛇舌草。  2.人肺癌A549细胞经无血清培养基诱导培养形成肺癌干细胞球,流式细胞仪检测其CD133阳性率明显高于正常肺癌细胞。  3.白花蛇舌草水提物能减弱A549肺癌干细胞的细胞活力,抑制肺癌干细胞的增殖。  4.白花蛇舌草水提物使A549肺癌干细胞的细胞凋亡率增加。  5.白花蛇舌草阻滞A549肺癌干细胞的细胞周期,使细胞停滞于G1期。
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