Birt-Hogg-Dubé(BHD)综合征是一种动物遗传疾病,目前认为FLCN突变是导致BHD综合征的一个主要遗传因素,然而FLCN的生物学功能与BHD综合征的关系至今仍未阐明。有证据表明,FLCN能够结合多种Rab家族蛋白调节细胞内囊泡运输过程。我们的近期研究发现,FLCN是回收运输关键调节因子Rab11A的一个结合蛋白,FLCN通过DENN蛋白结构域与Rab11A结合,抑制氨基酸转运蛋白PAT1向溶酶体运输,促进PAT1向细胞表面运输,这有助于维持溶酶体内的氨基酸水平,从而正向调控mTORC1信号通路。该发现揭示出FLCN在回收运输中的一项新功能,并为阐明FLCN的生物学功能提供了新线索。为了深入调查FLCN与Rab11A作用的分子机理,在本项研究中,我们使用体外培养的人源胚胎肾细胞HEK293为模型,采用多种生物化学的研究方法调查了FLCN与Rab11A的结合情况,获得了以下主要结果。(1)为了调查FLCN能否直接结合Rab11A,我们使用原核表达系统分别制备了人源FLCN蛋白,使用真核系统表达了Rab11A蛋白,然后使用纯化的FLCN和Rab11A蛋白开展了体外pull down实验。结果发现FLCN在体外不能与Rab11直接结合,提示FLCN可能通过其它效应因子结合Rab11A。(2)FIP5是在体内广泛表达的一个Rab11A的效应因子,为了研究FIP5是否是帮助FLCN与Rab11A结合的一个桥梁蛋白,我们制备了稳定干扰FIP5的HEK293细胞系(shFIP5),发现抑制FIP5的表达对mTORC1的活性没有显著影响,免疫共沉淀的实验结果显示抑制FIP5的表达不影响FLCN与Rab11A结合。(3)为了明确FIP5在FLCN-Rab11A结合中的作用,我们利用CRISPR/Cas9基因编辑技术制备了FIP5基因敲除的HEK293细胞系。结果发现,敲除FIP5对mTORC1活性没有显著影响,FLCN与Rab11的相互作用也没有显著变化。根据以上结果,我们认为FLCN可能通过某种未知的桥梁蛋白与Rab11结合,在这个过程中,FIP5没有起主要的作用。