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本文是关于“乳炎康”注射液对奶牛乳源金黄色葡萄球菌耐药性消除作用的研究。以临床分离的一株乳源金黄色葡萄球菌,作为本试验的受试菌株。用生化鉴定方法与利用细菌通用引物对细菌的16S rRNA基因进行PCR扩增和测序,再通过测序结果与已知种属的16S rRNA基因序列进行同源性比较确定临床分离菌株的种类。结果显示:临床分离株为金黄色葡萄球菌。选用15种抗生素进行药物敏感性检测,以确定分离株耐药谱,结果显示:金葡菌对氨苄西林(AMP),阿莫西林(AMO),红霉素(EYR)MIC均＞128μg/mL,呈高度耐药,青霉素(PG)对金葡菌MIC为4μg/mL,呈高度耐药,对其他10种抗生素敏感。以“乳炎康”注射液为消除剂,临床分离菌株为靶细菌,用影印培养法,进行体外耐药质粒消除试验,并以SDS作为对照,结果显示:“乳炎康”注射液对耐药金黄色葡萄球菌质粒有消除作用,作用24h其1/2MIC、1/4 MIC、1/8 MIC浓度的消除率分别为2%、2.6%、3.6%,延长作用时间至48h其1/2MIC、1/4 MIC、1/8 MIC浓度的消除率分别为2.8%、3.6%、4.4%。对照组SDS消除率分别为0.4%、0.2%、0%,延长作用时间至48h消除率分别为0.8%、0.6%、0%。将中药和SDS对受试菌株的消除率经X~2检验,“乳炎康”注射液消除结果与SDS对照组比较,均有极显著差异(P＜0.01)。对消除子进行质粒抽提,经琼脂凝胶糖电泳后,结果显示:经“乳炎康”注射液作用后,消除菌株缺失1至2条质粒带,也有消除菌株没有缺失质粒带,但条带明显变淡。消除菌株和原始耐药株药敏试验结果显示:质粒条带消失的消除菌株的抑菌圈明显扩大,特别是阿莫西林的抑菌圈扩大至20.30mm,成为AMO敏感菌株,PG、AMP抑菌圈也有所增大,但仍在耐药范围,ERY的抑菌圈作用前后没有变化;质粒条带未消失的消除菌株抑菌圈明显扩大,AMO抑菌圈扩大至17.96 mm,仍为耐药菌株。PG、AMP、ERY抑菌圈变化与前者相同。结果提示,耐药金葡菌对AMO的耐药可能是由质粒引起。对“乳炎康”注射液作用前后受试菌株的blaⅠ和blaR基因进行PCR扩增,测序和对比分析,结果表明:blaⅠ的基因在“乳炎康”注射液作用的前后碱基没有发生改变。而“乳炎康”注射液作用后,blaR基因在发现1003-1050bp缺失了48bp,在1699处发现AT置换,在1704处缺失碱基C,在1710处缺失碱基A。结果提示,中药“乳炎康”注射液对金葡菌的耐药基因有诱导突变作用,使金葡菌的耐药性随着基因的突变而丧失,并且“乳炎康”注射液的作用位点具有选择性。本次试验运用分子生物学手段对“乳炎康”注射液作用后的金黄色葡萄球菌β-内酰胺耐药基因进行测序,对“乳炎康”注射液具体机制进行了初步探讨,“乳炎康”注射液对金葡菌的耐药基因有诱导突变作用,使金葡菌的耐药性随着基因的突变而丧失。初步揭示了“乳炎康”注射液消除耐药金黄色葡萄球菌耐药性机制,为进一步研究中药消除耐药性提供了实验依据,从而在分子水平上阐述中草药复方制剂的作用机制,同时为中草药在临床生产实践中的应用提供有利的证据。利用基因测序和质粒DNA抽提,细菌总DNA提取,初步了解金黄色葡萄球菌获得耐药性的途径。