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受精作用是将上一代的基因组传递给下一代,并开始一个新生命体生长的细胞机制的总和。在哺乳动物中,精卵融合是通过精子和卵子表面多种分子的相互作用完成的,但目前对这些分子的相互作用机制还不清楚。到目前为止鉴定出若干参与精卵融合的蛋白质,其中精子蛋白有IZUMO蛋白家族、CRISPs家族蛋白、SLLP1、PDIA3、TSSK6、SPESP1和EQUATORIN等,卵子上有JUNO等蛋白。现在的研究多集中在这些蛋白质之间的相互作用模式上。本研究克隆了绵羊Izumo2 cDNA序列,原核表达并纯化GST-IZUMO2融合蛋白,用纯化后的融合蛋白免疫小鼠,制备小鼠抗绵羊IZUMO2腹水多克隆抗体,研究IZUMO2蛋白在睾丸和在精子上的定位。本研究还使用酵母双杂交技术初步探究了IZUMO2 与 IZUMO1、IZUMO3、IZUMO4、PDIA3、TSSK6、SPESP1、SLLP1、 CRISP1、MN9之间的相互作用。以绵羊睾丸组织总cDNA为模板,根据GenBank序列(XM 004015399.1)设计引物克隆绵羊Izumo2 cDNA,全长为813 bp,其中编码区为666 bp, BLAST结果显示其与GenBank数据库中的绵羊预测序列相似度为98.6%。克隆得到的绵羊Izumo2 cDNA序列编码222个氨基酸,其中从N端开始前15个氨基酸为信号肽,第186-206个氨基酸构成跨膜结构域。构建原核表达质粒pGEX-Izumo2,转化E. coli BL21(DE3)感受态菌,用IPTG诱导表达了分子量约为50 kDa的GST-IZUMO2融合蛋白,并采用SDS-PAGE切胶纯化法纯化GST-IZUM02融合蛋白。用纯化后的融合蛋白免疫小鼠,制备并纯化小鼠抗绵羊IZUM02腹水多克隆抗体。用纯化后的抗体进行免疫组织化学研究IZUM02蛋白在睾丸和精子上的定位,结果显示IZUMO2蛋白在绵羊睾丸组织的各期细胞中均会表达；在精子发生顶体反应前IZUMO2蛋白位于精子的头部,当精子发生顶体反应后IZUM02蛋白消失。为了探寻IZUM02蛋白与精子上的其他精卵融合相关蛋白的关系,本研究利用酵母双杂交技术初步探究了IZUMO2与IZUMO1、IZUMO3、IZUMO4、 PDIA3、TSSK6、SPESP1、SLLP1、CRISP1、MN9之间的相互作用,结果未发现相互作用。