论文部分内容阅读
结肠是人体的重要脏器之一，其上皮在生命活动中承担着吸收、分泌和防御等重要功能。同时，随着年龄的增长，不仅结肠上皮的各种生理功能逐渐减退，而且包括恶性肿瘤在内的多种肠道疾病的发病率显著升高。因此，筛选结肠上皮的衰老相关蛋白质，不仅有助于阐明结肠上皮的生理功能，而且有利于揭示结肠上皮衰老及衰老相关疾病的发生机制，以便为延缓结肠上皮的衰老，以及为衰老相关的结肠疾病的预防和治疗提供科学依据。为筛选结肠上皮的衰老相关蛋白质，本实验室在前期工作中，采用比较蛋白质组学方法建立了青年组和老年组结肠上皮的双向凝胶电泳图谱，鉴定了17个青年和老年人结肠上皮差异表达的蛋白质，提示这些蛋白质可能与结肠上皮衰老相关。本研究在前期研究的基础上，首先采用免疫组织化学或Real-time quantitative RT-PCR方法检测4个差异蛋白质(40S ribosomal protein SA、EF-Tu、Rhodanese、Rack1)在青年和老年人结肠上皮中的表达水平；然后采用D-半乳糖诱导方法建立NIH／3T3细胞复制性衰老模型，应用Western blot检测3个差异蛋白质(EF-Tu、Rhodanese、Rack1)在衰老NIH／3T3细胞中的表达变化；最后应用siRNA技术抑制Rack1在NIH／3T3细胞中的表达，观察Rack1表达下调能否促进NIH／3T3细胞衰老。主要结果如下：1)与青年人比较，EF-Tu、Rhodanese和Rack1的表达水平在老年人结肠上皮中明显下调，而40S ribosomal protein SA的表达水平显著上调，4个蛋白质的表达变化与比较蛋白质组学的研究结果一致。2)成功地建立了NIH／3T3细胞复制性衰老模型，观察到Rhodanese和EF-Tu在衰老NIH／3T3细胞中的表达水平显著下调，说明Rhodanese和EF-Tu表达下调可能与体外细胞衰老有关。3)采用siRNA技术成功地下调Rack1在NIH／3T3细胞中的表达，观测到Rack1表达下调具有促进NIH／3T3细胞衰老的作用。研究结果表明，EF-Tu、Rhodanese、Rack1和40S ribosomal proteinSA为结肠上皮衰老相关的蛋白质；Rhodanese和EF-Tu表达不仅在老年人结肠上皮中明显下调，而且可能与体外细胞衰老有关；Rack1表达下调具有促进体外培养细胞衰老的作用。研究结果为阐明结肠上皮的生理功能以及揭示结肠上皮的衰老机制提供了实验依据。