论文部分内容阅读
肝癌是诊治困难、预后极差的一种恶性肿瘤,全球肝癌发病率、病死率均位居各肿瘤前列,转移复发是影响肝细胞性肝癌(human hepatocellular carcinoma,HCC)术后生存的最大障碍。肝癌的发生发展以及转移复发均是多因素参与的多环节的病理过程,传统的单基因研究模式限制了肝癌相关因素的研究发展。近年来迅速发展的蛋白质组学研究,能动态、整体、定量地考察疾病发生发展过程中全部蛋白质种类和数量的变化,对于探讨疾病机理、寻找疾病诊断的特异性标志物和药物治疗的靶标来说,是一种有效的高通量的研究模式,可获得一些传统手段无法得到的新蛋白标志物、新关键分子,极大地丰富诊断标志物的选择组合及复杂致病机理的全面阐明。运用该研究策略,本研究通过对转移和非转移人肝细胞性肝癌组织、肝癌与癌旁组织的全蛋白质组表达谱差异分析,筛选出一些有潜在应用价值的差异蛋白质,并对其中的差异分子HSP27在肝癌组织和肝癌细胞系中进行验证,同时采用RNA干扰技术以及与癌发生、侵袭等生物学特性有关的鉴定方法对HSP27进行了功能分析。 第一部分 人肝细胞性肝癌组织转移相关的蛋白质组学研究 本部分的研究目的是应用双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)结合基质辅助的激光解吸离子化—飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)等蛋白质组学技术,对临床和病理上均发现有转移的HCC组织和未发生转移的HCC组织的全蛋白质差异表达谱进行分析,筛查在转移过程中发挥重要作用的差异蛋白分子。 选择在临床和病理上提示有转移和未发生转移的肝细胞癌组织各6例,提取肝癌组织总蛋白,应用非线性pH3～10,长24cm的固定pH梯度的IPG胶条和12.5%的SDS-PAG进行双向凝胶电泳分离总蛋白,每一例样本均分别进行2次双向电泳以保证重复性,用Image Master软件对两组的全蛋白质组表达谱进行差异分析。结果在相同条件下,转移组(M组)平均检测到1102±56(n=12)个