目的:在东方国家的传统医学体系里，对植物预防与治疗疾病作用的探索已有数千年的历史。然而在过去的二十年间里，随着免疫学技术的发展和对药物作用机制研究技术的成熟，针对西洋参的药用价值及其机理的探索变得热门起来。其间一些令人振奋的研究成果逐步报道于世。据报道，西洋参的主要成分为多糖和人参皂甙，一些研究指出西洋参的多糖成分比人参皂甙有更强的免疫调节作用。COLD-FX是以人参多糖为主要成分的标准化产品，据报道它具有刺激B淋巴细胞提升免疫球蛋白和激活外周吞噬细胞的作用。同时，关于COLD-FX作用机制的相反报道也随之显现。此外，几项大规模对西洋参制品的临床研究结果也不相一致。这些结果提示着可能存在一些不明显的因素导致这种矛盾的结果的出现。本研究探索西洋参制品COLD-FX作用于不同状态下小鼠脾脏细胞后基因水平的变化。该研究将为进一步研究COLD-FX具体的作用机制提供线索。　　 方法:　　 1.COLD-FX由商业途径购得。使用磷酸盐缓冲液将药物粉末稀释到目标浓度使用。　　 2.免疫抑制小鼠细胞模型的建立　　 实验使用7周龄的C57BL/6小鼠，使用无菌操作技术将小鼠脾脏取出，裂解脾脏获得脾细胞后通过使用添加含地塞米松的细胞培养基对脾细胞进行培养。预实验设置不同浓度的地塞米松处理组，通过统计分析后得出地塞米松的最佳模型浓度。使用含地塞米松最佳模型浓度的培养基培养小鼠脾细胞2小时以建立细胞模型。模型建立后通过离心法去除地塞米松并用培养基重悬细胞团块从而得到可以使用的模型细胞。　　 3.处理组　　 实验使用的脾细胞分为四个不同处理组:1）、正常脾细胞组，使用磷酸盐缓冲液处理作为空白对照组;2）、正常刺激组，使用ConA处理（终浓度为1μg/孔）;3）、单纯免疫抑制组，使用地塞米松处理（使用终浓度为20ng/ml，处理2小时）;4）、免疫抑制刺激组，使用地塞米松（使用终浓度为20ng/ml，处理2小时）和ConA（终浓度为1μg/孔）。在研究COLD-FX作用时，各组均加入COLD-FX（终浓度为500ng/well）并进行细胞培养24小时。　　 4.MTT检测　　 提取后的小鼠脾细胞用含10％小牛血清的RPMI-1640培养基进行培养24小时和48小时。MTT试验对COLD-FX处理后各组淋巴细胞增殖性能进行测定。通过计算细胞增殖率比较各组的细胞增殖活性。　　 5.流式细胞仪分析　　 细胞体外培养结束后，使用流式细胞仪分析各处理组中含CD3，CD4，CD8和CD25的细胞亚型的组成比。收集培养的细胞并标记特异性的抗小鼠细胞抗体，用磷酸盐缓冲液冲洗后，使用BDLSRⅡ流式细胞仪进行检测。各组检测结果由FlowJo软件分析后得出。　　 6.Microarray基因检测　　 使用Illumina基因表达平台，Microarray技术检测COLD-FX作用于不同状态下小鼠脾脏细胞后基因表达水平。　　 7.Real-timePCR分析Ifng等基因的表达水平　　 实验所需探针从LifeTechnologies订购。使用ABI7900Real-timePCR系统。基因表达水平变化由ddCt方法分析得出。　　 结果:　　 1.各处理组脾细胞增殖特性的结果　　 MTT结果显示单纯免疫抑制组的吸光光度值(0.142±0.002)低于正常组(0.203±0.006)，差异具有统计学意义(P＜0.05）;免疫抑制刺激组的吸光光度值(0.532±0.008)低于正常刺激组(0.717±0.015)，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　 2.COLD-FX处理对各组脾细胞增殖特性的影响　　 细胞增殖率在免疫抑制组(17.31±0.03)增加的幅度比正常组(10.18±0.06)明显，差异有统计学意义(P＜0.05)。COLD-FX处理后，免疫抑制组(17.31±0.03)和免疫抑制刺激组(24.91±0.3)的细胞增殖率分别比正常组(10.18±0.06)和正常刺激组(11.92±0.07)高，差异有统计学意义(P＜0.05)。　　 3.COLD-FX对T细胞相关细胞表面标记物的影响结果显示4组的变化不相一致。但是在抑制组中CD25(82.3±0.2)表达和CD4/CD8比率(2.39)明显较COLD-FX处理前高，处理前CD25为(30.8±0.45),CD4/CD8比率为1.59。在免疫抑制刺激组中CD3由(52.1±0.05)降为(33.2±0.4)而CD25由(72.6±0.25)降为(27.8±1.75)。　　 4.COLD-FX处理后各组基因表达情况　　 结果显示只有单纯组对COLD-FX处理有反应，在单纯免疫抑制组许多基因表达受影响。而单纯免疫抑制组和对正常对照组前10位表达变化的基因中只有3个共同的基因变化一致，即Slpi和Wnt10a表达上调，Hbb-b1表达下调。使用DAVIDBioinformaticsResource对基因进行功能分类发现在正常组，1组基因表达上调，在免疫抑制组有5组基因变化明显（见表1），其中1组基因表达上调，3组基因下调。　　 5.Real-timePCR验证Ifng基因的表达　　 COLD-FX处理后Ifng基因在各处理组中的表达变化不一致，其中Microarry检测发现其在正常组中表达明显低下，这一结论得到Real-timePCR的证实。　　 结论:　　 实验发现4个处理组的小鼠脾细胞的淋巴细胞增殖活性和生物标记具有差别。Microarray检测结果表明，正常细胞组基因表达和其它各处理组之间表达有差异。对差异表达的基因进行功能分类表明单纯免疫抑制组细胞周期相关基因和IFN-γ传导通路活性同样也受到抑制。除了正常刺激组之外的其它各组，只发现一个基因Hbb-b1表达下调。在正常组和免疫抑制组，只有Slpi和Wnt10a两个基因表达上调。研究表明各组处理细胞对COLD-FX处理的药物学反应取决于细胞的状态，细胞的生存状态在其对COLD-FX处理反应的差异性上起着关键的作用。