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内皮抑素(endostatin)是1997年由哈佛大学的O’Reilly等从小鼠血管内皮瘤细胞的培养上清液中首次分离的一种内源性新血管形成(angiogenesis)抑制因子。为获得深入研究内皮抑素的有力工具,我们以毕赤酵母表达的内皮抑素为免疫原,免疫BALB/c小鼠。采用B淋巴细胞杂交瘤技术,以间接ELISA法筛选并获得分泌抗人内皮抑素的特异性单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)的杂交瘤细胞株。该株杂交瘤细胞分泌的McAb属于IgG1(λ型),命名为McAb 4E7。腹水McAb的效价为1×10-4～1×10-6,纯化后效价大于1×10-10,免疫印迹结果显示McAb 4E7特异性的与酵母及大肠杆菌表达的内皮抑素发生反应,而与bFGF等其它细胞因子不发生交叉反应。进一步的生物学功能研究发现,McAb 4E7在体外实验中可拮抗内皮抑素抑制人脐静脉内皮细胞迁移和管化形成作用,并能阻断脐静脉内皮细胞对内皮抑素的粘附作用;另外,在动物模型实验中McAb 4E7可拮抗内皮抑素对角膜新血管形成的抑制作用。 由于内皮抑素作用机制尚不明确,最近的研究表明其分子中包含有抑制新血管形成及促进新血管形成的片段。因此,我们利用具有拮抗内皮抑素功能的McAb 来筛选噬菌体15肽文库,旨在获得有功能的内皮抑素15肽线性表位或模拟空间表位,为内皮抑素的作用机制研究及小分子模拟肽药物的设计提供实验基础。经过四轮筛选我们获得了一段具有保守序列的噬菌体展示肽;在体内、外实验中证实可以模拟内皮抑素的抑制内皮细胞管化形成和角膜新血管形成的生理活性。 本研究中,我们以小鼠角膜新血管形成为模型,检验重组人内皮抑素