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脓毒症(Sepsis)是一种由机体感染病原微生物而形成的全身炎性反应综合征(Systemic inflammatory response syndrome,SIRS),严重时甚至可以导致休克,有着较高的致死率。而临床上尚未出现治疗脓毒症完全有效的药物,因此,寻找一个新的有效治疗脓毒症的药物显得尤为重要。近年来,蠕虫与脓毒症的关系备受关注,有研究证明:蠕虫感染可有效缓解脓毒症全身炎症反应。但用蠕虫感染来治疗脓毒症并不被患者所接受,因此,采用蠕虫虫源性蛋白来代替蠕虫感染来治疗脓毒症可以避开感染蠕虫的缺点并且发挥治疗作用。rSjCystatin是一种存在于日本血吸虫体内的的半胱氨酸蛋白酶高效抑制剂,作为一种蠕虫虫源性蛋白,已有体外实验证实其有一定的抗炎效果,但是目前rSjCystatin体内作用机制尚无报道。因此,本课题拟用rSjCystatin来观察对脓毒症的治疗效果,并初步探讨其免疫学机制,从而为rSj Cystatin成为新型的脓毒症治疗药物研究提供实验依据。目的本研究的主要目的是观察重组日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制(rSjCystat in)对脓毒症的治疗效果以及治疗后不同时间段的区别。通过小鼠的一般状态、生存率、病理切片的变化,结合小鼠肝肾功能,炎性因子及抗炎因子的变化,探讨rSjCystatin对治疗脓毒症的潜在应用价值。方法(1)构建、表达并纯化rSjCystatins蛋白,测定蛋白浓度。(2)构建小鼠脓毒症模型。将24只小鼠随机分为正常对照组(PBS组)、脓毒症组(LPS组)、治疗组(LPS+r SjCystatin组),建模后观察小鼠一般状态的变化及72h生存率。(3)构建小鼠脓毒症模型。48只小鼠随机分6组小鼠,即正常对照组(PBS组)、rSjCystatin组(rSjCystatin组)、12h脓毒症组(LPS组)和12h治疗组(LPS+rSjCystatin组)、24h脓毒症组(LPS组)和24h治疗组(LPS+r SjCystatin组)。根据不同时间段小组分别在造模后的12h和24h麻醉无痛处死小鼠,收集标本:小鼠血清、肝脏、肺脏、肾脏。HE染色小鼠肝、肺、肾。ELISA检测小鼠血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平,全自动生化仪检测小鼠血清中ALT(谷丙转氨酶)、AST(谷草转氨酶)、BUN(血尿素氮)和Cr(肌酐)水平。结果(1)正常对照组小鼠精神良好,活动正常,进食、进水正常,体毛光滑,色彩光亮。脓毒症组小鼠精神萎靡,活动减少,小鼠抱团,体温减少,少食或不食,体毛杂乱,无光泽,小鼠眼角黄白色分泌物增多,某些小鼠肛周有血便,72h生存率为0。rSjCystatin蛋白治疗组小鼠状态较LPS组改善,虽然也出现精神差,体毛蓬乱,活动少,少食等症状,但小鼠肛周无血便,眼角分泌物较少,较脓毒症组明显改善,且72 h生存率为36%,较LPS组明显升高。(2)脓毒症组(12h与24h)出现明显的器官损伤现象,镜下可见肝细胞索失去正常结构,肝细胞水肿,肝小叶炎性细胞浸润。肾中部分血管球皱缩,肾小管细胞水肿,肺纹理增粗。血清中ALT、AST、BUN、Cr、IL-6、TNF-α水平较对照组明显升高,IL-10虽有升高,但无明显差异(p<0.05),而且不同时间段小组相比无明显差异。(3)与对照组相比,治疗组(12h与24h)血清中ALT、AST、BUN、Cr、IL-6、TNF-α水平升高,IL-10水平降低(p<0.05),除IL-6之外,不同时间段组别相比无明显差异。(4)与21h与24h脓毒症组相比,21h与24h治疗组肝、肾、肺组织结构损伤明显减轻,且血清中ALT、AST、BUN、TNF-α、IL-6水平明显降低,IL-10水平明显升高(p<0.05)。(5)rSjCystatin蛋白组小鼠与对照组小鼠相比,肝、肾、肺组织结构及肝肾功能无明显差异,IL-10因子水平明显升高(p<0.05)。结论:rSj Cystatin蛋白可明显改善脓毒症一般状况,提高小鼠生存率,改善器官组织病理损伤,降低血清中致炎因子TNF-α、IL-6的水平,升高抗炎因子IL-10升高,对脓毒症有显著的治疗作用。