论文部分内容阅读
研究背景丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus, HCV)主要通过血液传播,引起的丙型病毒性肝炎(以下简称“丙型肝炎”)呈世界范围流行。由于丙型肝炎发病隐匿、症状不典型,因此其临床诊断主要依靠实验室的检测结果。HCV特异性抗体是丙型肝炎临床诊断中实验室检测的主要指标,针对HCV抗体的检测主要分为筛查试验和补充试验两部分。抗体的筛查试验,筛查试验一般采用酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA),对于筛查实验结果呈阳性反应的样本采用特异性更好的补充试验对结果进行确证,补充实验通常采用重组免疫印迹试验(Recombinant Immunoblot Assay,RIBA),筛查实验和补充实验配合使用,形成一系列的检测策略,从而为临床诊断提供可靠的结果。我国各级临床实验室虽然已经广泛开展了HCV相关检测,但是仍然没有明确的检测策略以及对应的结果解释。对此,卫生与计划生育委员会委托中国疾控中心编写了《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》(试行)(以下简称《规范》),其中对HCV临床诊断的检测策略做了详细的要求,提出了HCV临床诊断抗体筛查策略、HCV临床诊断核酸检测策略等。HCV临床诊断核酸检测策略是对HCV抗体筛查阳性反应的样本采用核酸扩增检(Nucleric acid Amplification Test, NAT)和RIBA组合使用的检测方法。任何一种疾病检测策略在应用之前,都必须经过严密的评估,确定其可用性、准确性、可靠性后方可推广使用。我国新颁发的《规范》中规定的临床诊断实验室检测策略己完成了抗体检测策略的评估,本研究主要围绕核酸检测策略部分进行评估。研究目的1.对后续将用于HCV临床i诊断核酸检测策略中的HCV核酸检测试剂的性能进行评估。2.在国家艾滋病参比实验室进行HCV临床诊断核酸检测策略的实验室小样本范围评估。3.在多个现场试点进行HCV临床诊断核酸检测策略应用的评估,进行证明性研究,提供一种可推广到全国多点使用的、合理的、可靠的检测策略。4.为国家级策略评估三阶段中第三阶段的HCV临床诊断检测策略实施后的评估奠定基础。为进一步修订《规范》中HCV检测策略提供依据,使我国丙型肝炎的临床诊断实验室检测流程更规范。研究方法1.方法学评价部分：建立HCV核酸检测基础血清盘、HCV分亚型血清盘、HCV RNA线性血清盘、HCV RNA灵敏度血清盘、参比室干扰样本血清盘、HCV核酸精密度血清盘。用HCV核酸检测试剂对己建立的血清盘进行盲法检测。对检测结果进行计算求得待评估试剂的阳性符合率、阴性符合率、亚型检出能力、线性、分析灵敏度、分析特异性、精密度等指标以评价检测方法的总体性能。2.临床诊断核酸检测策略评估部分的研究包括两个阶段：第一阶段,建立一套本底信息明确的血清盘用于HCV临床诊断核酸检测策略在国家艾滋病参比实验室范围内的评估。第二阶段,选择北京、天津两地作为试点,对所选的试点现场进行丙型肝炎临床诊断核酸检测策略的大样本评估,参与评估的样本分别来自2013年HCV监测哨点和HIV监测哨点的吸毒人群以及北京市肾透析丙型肝炎流行病学调查的肾透析人群。两个评估阶段均与抗体检测补充策略即RIBA单独作为筛查阳性样本补充实验的检测策略相比较,计算检测策略的符合率等指标,评估检测策略的应用效果,同时对核酸检测策略在不同人群、不同地点、不同样本量检测的总体性能进行比较。结果1. HCV RNA检测试剂的阳性符合率为49/50(98%)；阴性符合率为50/50(100%),总符合率为99/100(99%)。对各种可能对临床检测产生干扰的样本的分析特异性为100%。对HCV1到6个型别共9种亚型均具有检出能力。对HCV RNA浓度分别为低、中、高(102、104、106IU/mL)三份样本的检测中,除低浓度样本外对中、高浓度样本的天内精密度均小于6%,天间精密度分别为9.28%、5.03%、1.53%,总精密度分别为11.55%、4.45%、3.08%。磁珠提取HCV核酸检测试剂与Roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HCV Test定量结果间的线性相关系数r值为0.9335。2.HCV临床诊断核酸检测策略在参比室小样本及现场大量样本进行应用的检测敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值均能达到100%。HCV临床诊断核酸检测策略的整体检测性能在吸毒人群和肾透析人群中无统计学差异(P>0.05)。策略的整体检测性能在应用于参比实验室的小样本与试点现场大样本之间有强一致性,两者之间无统计学差异。结论1.HCV核酸检测试剂有较高的阳性符合率和阴性符合率,且精密度、灵敏度都较高,对各亚型均由检出能力,适合用于HCV临床诊断核酸检测策略的评估。2.我国《丙型肝炎病毒实验室检测技术规范》(试行)中的临床诊断核酸检测策略在参比实验室的小范围内及多个试点现场的应用效果均较好,对不同HCV感染率人群的检测效力差异不明显,具有普遍适用性,可有效降低检测的假阳性率,并显著降低检测成本。