抗霜霉病相关基因的鉴定

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:gan402771387
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黄瓜霜霉病是保护地栽培黄瓜的主要病害,黄瓜抗霜霉病基因的研究是目前抗病育种领域的一项热点工作。本研究以抗霜霉病黄瓜品种东农129作为试验材料,利用DDRT-PCR技术研究黄瓜叶片经霜霉病病原菌侵染后基因表达的差异,其目的在于寻找与黄瓜霜霉病抗性相关的基因,辅助黄瓜抗病育种工作。并对所获得的差异表达基因进行了时空表达分析,进一步验证了所获基因的表达特异性。主要研究结果包括:(1)反向Northern鉴定将31个差异表达基因的的假阳性片段剔除后,获得3个阳性差异表达基因,其经连接转化后发现50号差异表达基因片段存在电泳共迁移现象,其中存在2个基因片段,因此共克隆出4条与黄瓜霜霉病抗性相关的阳性差异表达基因,分别为49-2,50-5,50-7,52-14。经联机比对发现,50-7号基因与黄瓜脂氧合酶基因高度同源,相似性达100%,得分197,其他3个基因为未知新基因。(2)对所得4个基因进行特异性表达分析,其中49-2基因在霜霉病病原菌诱导黄瓜植株6h后在叶片中大量表达,直至植株大量受损的侵染后期仍有一定量的表达,表达过程可能伴随整个霜霉病侵染期;50-5基因在霜霉病诱导24h后植株叶片中大量表达,48h后表达量有所减弱,直至植株大量受损的侵染后期仍有一定量的表达;50-7基因仅在植株经霜霉病诱导后24h的叶片中特异表达;52-14基因只在霜霉病诱导后24h,48h的植株叶片中特异表达。49-2基因可在其在黄瓜幼嫩果实和衰老果实中表达,50-5基因可在黄瓜幼嫩果实中表达。(3) 4个基因均存在于抗霜霉病品种东农129的基因组中,在易感病品种L18的基因组中不存在,说明本研究获得的基因为抗霜霉病黄瓜品种中特有的,经霜霉菌诱导后特异表达的基因,可用于黄瓜抗霜霉病品种的分子筛选。(4)构建了黄瓜mRNA差异显示技术的反应体系,该体系在实际工作中操作简便,重复性好,cDNA模板的使用量较以往文献报道减少了一倍,节约了工作成本。
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