特发性肺纤维化（Idiopathic pulmonary fibrosis,IPF）是一种慢性、进行性加重的肺间质疾病，发病率呈上升趋势。迄今IPF病因不明，缺乏有效治疗手段，IPF确诊后中位生存期不足3年，预后极差，是临床研究的热点和难点。糖皮质激素或联合免疫抑制剂仍然是目前治疗IPF的主要手段，但有效率低。近年来得益于分子生物科学的快速发展，通过细胞因子治疗肺纤维化已得到证实。碱性成纤维因子（Basic fibroblast growth factor，bFGF）是一种多功能损伤修复因子，但在肺纤维化发生、发展过程中其生物学意义尚缺乏完整的研究报道。鉴于此，本实验将bFGF与胶原结合域（Collagen-bind domain，CBD）连接，重组后的CBD-bFGF干预小鼠肺纤维化各个阶段，初步发现在小鼠早期肺纤维化给予CBD-bFGF无明显的生物学作用，而在小鼠中晚期肺纤维化给予CBD-bFGF可促进TGF-β1的表达，并与TGF-β1协同，加重小鼠肺纤维化。本实验为今后研究干扰bFGF的表达，以治疗肺纤维化的新策略提供了基础。第一部分：CBD-bFGF对BLM诱导小鼠肺纤维化的早期干预作用及相关机制目的：探索胶原结合域-成纤维细胞生长因子（CBD-bFGF）对博莱霉素（Bleomycin,BLM）诱导小鼠肺纤维化的早期干预作用及机制。方法：将C57/BL雄性小鼠160只随机分为3组：（1）Sham组40只；（2）BLM组60只；（3）BLM+bFGF组60只。Sham组两次气管暴露注入0.1ml生理盐水；BLM组气管注入先博莱霉素溶液（3mg/kg），后立即气管注入0.1ml生理盐水；BLM+bFGF组先气管注入博莱霉素溶液（3mg/kg），后立即气管注入等体积CBD-bFGF溶液（0.1ml,20ug/ml）。分别于7d、14d、21d、28d观察下列指标：（1）小鼠一般情况；（2）小鼠体重变化情况；（3）H&E、Masson染色检测肺组织形态学；（4）免疫组织化学法检测肺组织中的α-肌动蛋白(α-smucle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白（Collagen-I、Col-I）、III型胶原蛋白（Collagen-III，Col-III）、转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）等蛋白表达。结果：(1）Sham组小鼠呼吸平稳，行动自如，摄食、饮水正常；BLM组小鼠自3d起出现呼吸急促，行动迟缓，食欲不振，肢端出现紫绀等表现；BLM+bFGF组一般情况与BLM组相似。（2）Sham组小鼠体重持续增加；BLM组体重持续下降，21d后轻度上升，与Sham组比较各观察点差异有统计学差异（p<0.01）， BLM+bFGF组体重逐渐下降，各时间点与BLM组比较差异无统计学意义（p>0.05）。（3）Sham组光镜下未见明显异常病理改变；BLM组光镜下肺组织大量纤维细胞增殖，细胞外基质过度沉积，部分肺组织结构破坏，可见肺泡腔塌陷或消失，肺纤维化形成，Ashcroft评分与Sham组比较有显著差异（p<0.01）；BLM+bFGF组光镜下小鼠肺纤维化形成，与BLM组比较Ashcroft评分无统计学差异（p>0.05）。（4）各组肺组织可见α-SMA、Collagen-I、Collagen-III蛋白的表达，BLM+bFGF组、BLM组分别与sham组比较均有显著性增多，差异有统计学意义（p<0.01, p<0.01），但BLM+bFGF组与BLM组之间比较，差异无统计学意义（p>0.05）。在7d、14d观察点，BLM+bFGF组、BLM组TGF-β1表达较sham组显著增多（p<0.01, p<0.01），21d、28d观察点BLM+bFGF组、BLM组TGF-β1表达下降，与sham组比较差异有统计学意义（p<0.05, p<0.05），BLM+bFGF组,与BLM组相比各相应时间点差异无统计学意义（p>0.05）。结论：（1）博莱霉素能成功诱导小鼠肺纤维化；（2）早期给予CBD-bFGF对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化无显著的生物学作用。第二部分：CBD-bFGF对BLM诱导小鼠肺纤维化的中晚期干预作及相关机制目的：探索胶原结合域-成纤维细胞生长因子（CBD-bFGF）对博莱霉素（Bleomycin,BLM）诱导小鼠肺纤维化的中晚期干预作用及机制。方法：按照第一部分方法复制140只小鼠肺纤维化模型后，正常饲养6w。造模存活小鼠随机分为2组：（1）BLM组40只；（2）BLM+bFGF组40只。BLM组气管注入0.1ml生理盐水，BLM+bFGF组气管注入同体积CBD-bFGF（2ug/只）。按照第一部分方法设置Sham组。分别于18w、22w、26w.观察下列指标：(1)小鼠体重变化（2）H&E、Masson染色检测肺组织形态学；（3）免疫组织化学法检测肺组织中α-SMA、Col-I、Col-III、TGF-β1等蛋白表达；（4）小鼠肺功能和血气分析。结果：（1）Sham对照组在气管暴露给予生理盐水后体重轻度下降，后体重持续增加；BLM组：0-10w体重持续下降，26w体重轻度恢复，各时间点与Sham组比较差异有统计学意义（p<0.05）；BLM＋bFGF组:体重持续降低，14w后各相应时间点体重均低于BLM组，差异有统计学意义（p<0.05）。（2）Sham组光镜下肺组织正常；BLM组18w、22w、26w肺组织胶原纤维及成纤维细胞广泛增生，肺泡结构严重破坏，部分肺泡腔萎陷、消失；BLM+bFGF组肺纤维化程度较BLM组加重，18w观察点Ashcroft评分差异有统计学意义（p<0.05），22w、26w观察点有显著性差异（p<0.01）。（3）BLM+bFGF组肺组织α-SMA、Col-I、Col-III等蛋白表达较BLM组增多，差异有统计学意义（p<0.01，p<0.05，p<0.05）。在26w观察点，BLM+bFGF组TGF-β1表达较BLM组增加，差异有统计学意义（p<0.05）。（4）与Sham组相比，BLM组与BLM+bFGF组肺顺应性下降，差异有统计学意义（p<0.05）。BLM+bFGF组较BLM组下降更显著，两组比较差异有统计学意义（p<0.05）。（5）血气分析中，BLM组与BLM+bFGF组均有PO2下降，CO2潴留表现，与Sham组相比差异有统计学意义（p<0.05）。BLM+bFGF组PO2下降，CO2潴留程度高于BLM组，差异有统计学意义（p<0.05）。结论：CBD-bFGF对博莱霉素诱导的中晚期小鼠肺纤维化，不具有损伤修复作用，且能通过促进TGF-β1的表达，加重小鼠肺纤维化。