目的 确定问号钩端螺旋体赖株基因组编码的溶血素Sph2、TlyA、HlpA裂解红细胞释放出游离状态亚铁血红素(heme),heme诱导巨噬细胞产生炎症因子,从而加深了解钩体溶血素在钩体致病过程中的作用,进一步阐明钩体的致病机制。方法 (1)T-A克隆钩体溶血素Sph2、TlyA、HlpA的编码基因片段sph2、tlyA、hlpA,构建以上各基因的原核表达系统,纯化各目的蛋白并测定各重组表达蛋白浓度;(2)采用血平板溶血圈及分光光度法检测重组表达蛋白的溶血活性;(3)应用分光光度法定量测定重组表达蛋白裂解2%绵羊血红细胞悬液后释放的heme;(4)采用Real-timePCR检测NF-κB、p38MAPK或JNK信号通路阻断前后heme刺激人THP-1和小鼠J774A.1巨噬细胞产生炎症因子IL-6、IL-18、IL-33、IL-1β、TNF-α MCP-1、IL-8(人)、KC(小鼠)的 mRNA 水平变化。结果 成功构建目的基因sph2、tlyA、hlpA的原核表达系统,得到具有溶血活性的各重组溶血素蛋白;rSph2、rTlyA、rHlpA均能够引起绵羊红细胞裂解并释放出heme;heme可通过NF-κB、p38MAPK或JNK信号通路诱导人THP-1巨噬细胞炎症因子IL-6、IL-8、IL-18、MCP-1的mRNA水平上调,诱导小鼠J774A.1巨噬细胞炎症因子IL-6、KC、IL-18、IL-33、IL-1β和TNF-α的mRNA水平上调。结论问号钩端螺旋体溶血素rSph2,rH1pA,rT1yA具有溶血活性并能裂解红细胞释放heme,heme可刺激巨噬细胞炎症因子表达,从而与钩体溶血素诱导巨噬细胞产生的促炎因子协同引起宿主细胞的炎症损伤,这将有助于更深入地了解钩体感染宿主后引起的炎症反应机制。