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槐耳为多孔菌科真菌槐栓菌的子实体,生长于槐、洋槐及青檀等树干上。槐耳的热水提取物槐耳清膏广泛作用于多种恶性肿瘤,包括结肠癌、乳腺癌、肝癌、胃癌等,在临床治疗或者辅助西药治疗中取得一定确切的疗效。值得注意的是这些肿瘤组织中都存在哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号高度活化。槐耳清膏能治疗多种肿瘤,但其具体的机制仍不清楚,它在肿瘤发生发展中的作用也尚未完全明确。mTOR在一系列控制细胞的生长、增殖、分化和存活等细胞信号通路中处于核心地位,它受上游的原癌基因如RTKs、PI3K和AKT,和抑癌基因如PTEN、TSC1和TSC2的调控。这些原癌基因和抑癌基因的异常激活或失活都将导致mTOR信号通路的过度活化而致瘤,因此mTOR表达异常在肿瘤细胞中十分常见。自噬是溶酶体介导的对细胞内蛋白质和细胞器降解的动态过程,是真核细胞特有的生命现象。自噬受mTOR信号直接调节,对肿瘤细胞具有促进生长或者抑制增殖的作用。鉴于槐耳清膏对多种mTOR信号高表达的肿瘤有抑制作用,我们体外观察槐耳清膏作用的A549细胞mTOR信号表达水平和自噬发生水平的变化,论文第一部分表明：槐耳清膏能够通过下调,mTOR信号抑制A549细胞增殖,增强A549细胞自噬。槐耳清膏诱导的A549自噬增强对细胞的生存具有促进作用。结节硬化症(Tuberous Sclerosis Complex, TSC)是TSC1/TSC2蛋白复合物的功能丧失激活了蛋白激酶mTOR,从而导致细胞生长和增殖的失控。Rapamycin(中文译名,雷帕霉素)是一种特异的mTOR蛋白抑制剂,rapamycin类似物,如依维莫司是目前临床上非常有潜力的治疗结节性硬化症的药物。但有研究表明rapamycin类似物治疗结节性硬化症有耐药病例的出现,且rapamycin类似物价格高昂,rapamycin类似物的治疗之余也出现了很多副作用。研究发现,虽然rapamycin能特异性的抑制mTOR的活性,但是rapamycin抑制mTOR同时解除了mTOR对RTK/PI3K/AKT和ERK/MAPK等信号级联的负反馈抑制,这些作用都降低了rapamycin的疗效。论文第一部分研究发现槐耳清膏能够体外抑制A549细胞mTOR信号的活化。对此,我们设想槐耳清膏是否能够治疗以mTOR信号高度活化为突出特点的结节性硬化症。我们使用广泛应用的TSC2基因失活的细胞模型(TSC2敲除的小鼠胚胎成纤维细胞TSC2-/-MEFs、TSC2基因突变的大鼠子宫肌瘤细胞ELT-3)来验证我们的假设。论文第二部分表明：槐耳清膏能够体外抑制TSC2-/-MEFs和ELT-3的生长。进一步研究发现槐耳清膏能够下调TSC2-/-MEFs和ELT-3的mTOR信号。mTOR信号对于细胞自噬有直接的调节作用,本实验发现,槐耳清膏能够在体外抑制细胞生长的同时,诱导细胞自噬,这种自噬的诱导依赖于槐耳清膏对mTOR信号的下调。自噬对细胞有多种作用,一定浓度的槐耳清膏诱导的细胞自噬能够促进TSC2-/-MEFs存活,抑制ELT-3的生存。除此之外,槐耳清膏诱导TSC2-/-MEFs发生caspase-3依赖的细胞凋亡,可能是槐耳清膏抑制细胞生长的机制之一。