彗星试验研究和测定的是单个细胞DNA链断裂。在细胞DNA修复过程中断裂状态持续时间较短。运用DNA修复抑制剂可能使该试验对DNA加合物、修复较快的断裂等损伤形式的检测敏感性以及试验结果的重现性、稳定性得到进一步提高。 本研究在彗星试验中首次使用24孔板来培养和染毒细胞,联合运用羟基脲、阿糖胞苷、2′,3′-双脱氧胸苷三磷酸三种DNA修复抑制剂,探索三种抑制剂联合运用的合理浓度,研究抑制剂在此浓度下对V79细胞、小鼠肝原代细胞彗星试验的影响。同时,进一步研究阿糖胞苷和2′,3′-双脱氧胸苷三磷酸对不同类型DNA损伤修复的阻滞效应。 使用24孔板培养和染毒细胞,染毒前每孔细胞计数约为1×10~5～2×10~5,试验结果细胞分布均匀,密度适中。采用正交试验设计方法,结果显示:联合运用羟基脲1 mol/L、阿糖胞苷0.5mmol/L、2′,3′-双脱氧胸苷三磷酸20μmol/L或羟基脲2 mmol/L、阿糖胞苷0.1mmol/L、2′,3′-双脱氧胸苷三磷酸20μmol/L,抑制剂本身不会造成细胞DNA损伤,但能使0.01mmol/L重铬酸钾诱发的V79细胞彗星试验尾长显著增加。在此浓度下联合运用三种抑制剂均显著提高了V79细胞彗星试验和小鼠肝细胞彗星试验对饮水有机提取物、重铬酸钾、苯并(a)芘、联苯胺的敏感性。同时,理论上运用DNA修复抑制剂对彗星试验重现性和稳定性的改善也会发挥一定的作用。