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目的 构建人源性噬菌体单链抗体库，以筛选人源性抗乙型肝炎病毒表面抗原（抗HBs）的基因工程抗体。 方法 （1）抽取注射过乙肝疫苗并产生抗HBs抗体的正常人外周血，分离淋巴细胞，提取细胞总RNA （2）以Oligo（dT）15为引物将mRNA反转录为cDNA （3）根据抗体分子的第一框架区和第四框架区的保守性，设计简并引物 （4）PCR扩增重链和轻链的可变区序列（VH和VL） （5）设计一对互为模板的引物，PCR扩增连接肽Linker基因 （6）由Linker片段通过重叠延伸PCR连接扩增的VH和VL基因，形成单链抗体（ScFv）基因 （7）将ScFv基因克隆入具有相同酶切位点的噬菌粒载体pCANTAB5E中，然后转化大肠杆菌E.Coli TG1，辅助噬菌体M13K07的拯救，收集噬菌体上清，即为噬菌体抗体库 结果 （1） 我们设计的扩增抗体重链和轻链可变区的简并引物，成功地扩增出了VH和VL基因片段 （2）根据我们设计的Linker基因引物，成功地扩增出大约100bp的Linker基因（包括与VH和VL互补序列） 山西医科大学2003而颀十毕业论文 门)重叠延伸 PCR将 V。和 V。基因连接成约 750hp的单链抗体基 因 N)构建了 pCANTABSE沼CFV载体，转化 E．Colt TGI后，在含有 氨令青霉素的平板上长出阳性菌落，并经过PCR快速鉴定插入 片段大小的正确 （5）制备了人源性噬菌体抗体库，抗体片段以融合蛋白的形式表达 于噬菌体的表面，利于筛选 结 论 本课题通过建立人源性的噬菌体单链抗体库，以期从中筛选到 抗HBs的单链抗体，由于是人源性的，避免了鼠源性单克隆抗体 所产生的人抗鼠抗体反应，且由于是小分子的单链抗体，可以与干 扰素基因相偶联，是十分有希望的抗乙型肝炎病毒基因治疗方案， 而且为满足阻断乙肝病毒（HBV）感染的母婴垂直传播，具备生产 大量人源特异性强的抗体制品的要求。总之，抗HBS单链抗体在 临床上有着广泛的应用前景。