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目的:神经损伤,尤其周围神经损伤是临床常见病例,且发病率呈逐年增加的趋势。尽管周围神经能够自发性再生,但对于严重的周围神经损伤,其治疗效果尚不令人满意,而且其治疗手段仍存在一定局限性,因此探讨周围神经再生的分子机制,可为临床治疗周围神经损伤提供新的治疗策略并提高治疗效果。大鼠坐骨神经是研究周围神经再生修复的经典模型。坐骨神经损伤修复过程中,许多基因的表达发生改变,表明这些基因受到一定的表达调控。micro RNA(mi RNA)是一类长度约为22个核苷酸左右的小分子非编码RNA,可以在转录后调控基因的表达,为研究基因表达调控提供了新的模式。脑源性神经营养因子(BDNF)在周围神经再生中具有重要的调控作用,本论文旨在探讨坐骨神经再生过程中BDNF在转录后水平受到mi R-1的调控作用。方法:实验室前期芯片结果显示BDNF与mi R-1在坐骨神经再生过程中的表达具有负相关关系,Target Scan和Mi Randa软件预测BDNF可能被mi R-1靶向调控,并且在BDNF 3’-UTR中存在三个mi R-1的匹配区;将BDNF的3’-UTR构建到luciferase荧光素酶报告基因下游,通过双报告基因系统分析确定mi R-1是否直接靶向BDNF的3’-UTR,进一步通过构建BDNF 3’-UTR的突变体(将其与mi R-1的三个匹配区分别单独突变、两两组合突变和三个位点同时突变),再次通过双报告基因系统确定三个匹配区对于其靶向关系的重要性;在施万细胞中转染mi R-1的模拟物和抑制剂,通过Real-time PCR和Western blotting分析确定mi R-1在哪个层面调控BDNF;取40只成年雄性SD大鼠(180-220 g),随机分为5组,构建大鼠左后肢坐骨神经缺损1 cm模型,在损伤后的0 h,1 d,4 d,7 d和14 d处死大鼠,取坐骨神经缺口处向上0.5 cm的近端神经用于分析,Real-time PCR确定mi R-1和BDNF m RNA在近端神经的表达变化,Western blotting分析BDNF蛋白在近端神经的表达变化;Ed U染色和Transwell确定mi R-1对施万细胞增殖和迁移功能的影响,ELISA确定mi R-1对施万细胞分泌BDNF的影响,并进一步通过功能回复实验确定mi R-1通过BDNF影响施万细胞的增殖和迁移。结果:mi R-1可以直接靶向BDNF 3’-UTR,并且mi R-1在BDNF3’-UTR不同位置上的三个匹配区对于其靶向关系同等重要;mi R-1通过降解BDNF m RNA来抑制BDNF的表达;坐骨神经损伤后再生过程中,在0h,1 d,4 d,7 d,14 d,BDNF与mi R-1的表达变化基本呈现负相关关系,提示在周围神经再生过程中mi R-1可能在体内对BDNF具有转录后调控作用;mi R-1抑制原代培养的施万细胞的增殖、迁移,并且是通过BDNF来发挥影响施万细胞增殖和迁移功能;mi R-1也降低了施万细胞BDNF的分泌。结论:本论文首次发现在周围神经再生过程中,BDNF在转录后水平受到mi R-1的直接靶向调控作用,并且mi R-1通过BDNF明显抑制施万细胞的增殖、迁移和BDNF的分泌。本论文首次探讨了mi R-1在周围神经损伤后再生过程中的调控作用,丰富了mi RNA对周围神经再生调控作用的研究,有助于更全面的了解周围神经损伤和再生的分子机制。由于mi RNA片段较小,容易通过血神经屏障,因此在神经系统相关疾病中,通过mi R-1来调控BDNF的表达可以有效避免BDNF在临床应用上的限制,有助于BDNF和mi R-1作为新的治疗靶点的研究与开发。