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目的:观察辛伐他汀对高糖培养的恒河猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A)的生物学特性的影响,研究人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,h UCMSCs)联合辛伐他汀对高糖培养的RF/6A细胞的保护作用及Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)炎症信号通路的变化,探讨h UCMSCs联合辛伐他汀对RF/6A的炎症调节作用及机制。方法:(1)取第3~5代处于对数生长期的RF/6A细胞,实验分为6组,正常对照组(NG组)、高糖组(HG组)、辛伐他汀0.1μmol/L组(SIM 0.1组)、辛伐他汀1μmol/L组(SIM 1组)、辛伐他汀5μmol/L组(SIM 5组)、辛伐他汀10μmol/L组(SIM 10组)。RF/6A细胞长到60%~70%时,换用高糖培养液培养48小时,加入不同浓度的辛伐他汀干预24小时后检测。采用MTT法检测各组RF/6A细胞的增殖能力;粘附能力测定实验检测各组RF/6A细胞的粘附能力;Transwell小室检测各组RF/6A细胞的迁移能力;成管实验检测各组RF/6A细胞的管腔形成能力。(2)取第3~5代处于对数生长期的RF/6A细胞和h UCMSCs,实验分为5组,正常对照组(NG组)、高糖组(HG组)、辛伐他汀1μmol/L组(SIM组)、h UCMSCs 1:1 RF/6A组(MSCs组)、辛伐他汀1μmol/L联合h UCMSCs 1:1 RF/6A组(SIM+MSCs组)。MSCs组采用Transwell小室共培养系统,上层小室放置h UCMSCs,下层小室放置RF/6A细胞。SIM+MSCs组在共培养系统的培养液中加入1μmol/L辛伐他汀。采用MTT法检测各组RF/6A细胞的增殖能力;粘附能力测定实验检测各组RF/6A细胞的粘附能力;Transwell小室检测各组RF/6A细胞的迁移能力;成管实验检测各组RF/6A细胞的管腔形成能力;细胞免疫荧光检测各组RF/6A细胞TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β的表达;RT-PCR检测各组RF/6A细胞TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β的m RNA的表达。结果:(1)RF/6A细胞增殖实验、黏附实验、迁移实验及成管实验结果显示,HG组RF/6A细胞的增殖能力、粘附能力、迁移能力、管腔形成能力明显低于NG组,差异均有统计学意义(P<0.05)。SIM 0.1组、SIM 1组、SIM 5组RF/6A细胞增殖能力(0.32±0.02、0.36±0.01、0.27±0.02)较HG组(0.15±0.01)提高(P均<0.05),但SIM 10组RF/6A细胞增殖能力(0.14±0.03)较HG组下降,差异无统计学意义(t=0.79,P>0.05);SIM 0.1组、SIM 1组、SIM 5组黏附细胞所占面积百分比[(34.08±1.89)%、(46.23±1.02)%、(26.05±2.12)%/200倍视野]较HG组[(16.17±2.84)%/200倍视野]提高(P均<0.05),但SIM 10组RF/6A细胞粘附能力[(10.46±1.27)%/200倍视野]较HG组下降(P<0.05);SIM 0.1组、SIM 1组、SIM 5组、SIM 10组迁移细胞所占面积百分比[(23.28±2.38)%、(33.15±2.91)%、(17.06±1.03)%、(13.49±0.57)%/40倍视野]较HG组[(10.26±2.05)%/40倍视野]提高(P均<0.05);SIM 0.1组、SIM 1组、SIM 5组、SIM 10组RF/6A管腔形成能力[(15.40±1.51)、(19.80±0.84)、(11.20±1.30)、(8.00±1.00)个细胞/40倍视野]较HG组[(5.40±1.14)个细胞/40倍视野]提高(P均<0.05)。(2)SIM组、MSCs组、SIM+MSCs组RF/6A细胞的增殖能力、粘附能力、迁移能力、管腔形成能力较HG组提高,差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光结果显示,HG组TLR4、NF-κB、IL-1β、TNF-α的表达较NG组增强,SIM+MSCs组TLR4、NF-κB、IL-1β、TNF-α的表达较HG组减弱。RT-PCR结果显示,与HG组比较,NG组RF/6A细胞TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1βm RNA表达增加(P均<0.05),与HG组比较,SIM+MSCs组TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β表达下降(P均<0.05),SIM组NF-κB、IL-1β、TNF-α、MSCs组TLR4 m RNA表达较HG组无明显变化(P均>0.05)。结论:(1)高糖培养的RF/6A细胞的生物学特性较正常细胞减弱;1μmol/L辛伐他汀可显著改善高糖环境下RF/6A细胞的生物学功能。(2)h UCMSCs联合辛伐他汀可明显抑制TLR4通路炎症因子的表达,提高RF/6A细胞的修复作用,为应用h UCMSCs临床治疗糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)提供理论基础。