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乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是全世界急慢性肝炎、肝硬化、及肝细胞癌的主要原因。HBV含有C、S、P、X 4个开放阅读框,其中S区编码的三种蛋白质即小蛋白(SHBs),中蛋白(MHBs),大蛋白(LHBs),形成病毒包膜。其中LHBs与HBV相关性肝癌发生发展密切相关,但目前对LHBs蛋白水平的调控机制尚无报道。特定蛋白质的数量,除了受转录水平以及蛋白质合成的影响外,泛素化与去泛素化的动态平衡是一种非常重要的翻译后修饰调控机制。本研究旨在探讨影响LHBs蛋白水平的去泛素化酶及其机制。本研究采用细胞核酵母双杂交系统Matchmaker Gold Yeast Two-Hybrid System,构建pGBKT7-LHBs重组质粒,验证其可表达GAL4 BD-LHBs融合蛋白,以及无自激活现象。利用实验室保存的74种去泛素化酶酵母表达转化子库,采用一对一双杂交的方法筛选与LHBs相互作用的去泛素化酶,得到十种与LHBs相互作用的去泛素化酶,即含OTU结构域的泛素醛结合蛋白1(OTU Domain-Containing Ubiquitin Aldehyde-Binding Protein 1,OTUB1)、COP9信号体亚基5(COP9 Signalosome Subunit 5,COPS5)、COP9信号体亚基6(COP9Signalosome Subunit 6,COPS6)、泛素特异性肽酶26(Ubiquitin Specific Peptidase26,USP26)、泛素特异性肽酶29(Ubiquitin Specific Peptidase 29,USP29)、泛素特异性肽酶38(Ubiquitin Specific Peptidase 38,USP38)、泛素羧基末端水解酶(Ubiquitin Carboxyl-Terminal Hydrolase,BAP1)、去泛素化酶EIF3f(Deubiquitinating Enzyme EIF3f,EIF3S5)、Ataxin-3-Like蛋白(Ataxin-3-Like Protein,ATXN3L)、泛素C-末端水解酶L5(Ubiquitin C-Terminal Hydrolase L5,UCHL5)。验证这十种去泛素化酶在此酵母双杂交系统中无自激活现象,且也可表达相应的GAL4-AD融合表达蛋白。首先通过细胞共转染实验检测上述去泛素化酶是否对LHBs蛋白水平有影响,结果显示OTUB1可使LHBs蛋白表达水平上调。为进一步明确OTUB1是否通过蛋白相互作用改变LHBs蛋白水平,本研究通过GST pull down及哺乳动物双杂交实验验证检验OTUB1是否与LHBs有相互作用,结果发现OTUB1与LHBs在体外与细胞内仍具有相互作用,为后续研究奠定基础。