沙利度胺抑制肝癌细胞侵袭转移机制的初步研究

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目的:中国大陆原发性肝癌的发病率呈逐年升高的趋势,并且由于肿瘤的侵袭转移其死亡率也在升高。沙利度胺(thalidomide,ThD)目前用于多发性骨髓瘤、肝细胞癌、转移性结肠癌等的抗癌治疗。沙利度胺能影响肝癌的侵袭转移,而其作用肝细胞癌的分子作用机制尚不明确。因此,本研究通过沙利度胺作用于HepG2细胞来了解Nf-kb及骨桥蛋白(OPN)表达与HepG2细胞的增殖、凋亡及迁移能力的关系。  方法:采用一定浓度沙利度胺、核转录因子核因子-κB(NF-κB)活性特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)及沙利度胺联合PDTC作用于HepG2细胞后,CountingKit-8(CCk-8)法、细胞划痕、Transwell侵袭实验及流式细胞术实验检测沙利度胺及PDTC对HepG2细胞的增殖、凋亡及迁移能力的影响。蛋白印迹(Westernblot)实验检测结果来评价沙利度胺及PDTC作用后Nf-kb及OPN的表达情况。实验数据用均数±?标准差(x±s)表示,实验数据用SPSS17.0软件进行统计分析,两组间的比较用t检验,多组间的比较用单因素方差分析,显著性检验水准α取0.05。  结果:1、CCK-8实验结果显示:沙利度胺(100μg/ml)联合PDTC(10uM/L)组、沙利度胺(100μg/ml)组及PDTC(10uM/L)组在48h作用时间后细胞生存率为(30.407±2.596)%、(59.555±2.629)%、(48.374±5.997)%。三组间相比P值均<0.05,差异具有统计学意义。并且沙利度胺联合PDTC组相对沙利度胺及PDTC组可获得对HepG2细胞更高的抑制率。  2、细胞划痕实验结果显示:在药物作用48小时,沙利度胺(100μg/ml)联合PDTC(10uM/L)组、沙利度胺(100μg/ml)组及PDTC(10uM/L)组与对照组细胞迁移率之比分别为(49.701±8.672)%、(60.984±10.244)%、(73.198±10.960)%,三组间相比P值均<0.05,差异具有统计学意义,并且沙利度胺联合PDTC组的迁移率低于沙利度胺及PDTC组。  3、Tranwsell实验结果显示:在沙利度胺(100μg/ml)联合PDTC(10uM/L)、沙利度胺(100μg/ml)及PDTC(10uM/L)作用48h后,沙利度胺联合PDTC组穿过人工基底膜细胞数明显减少,与沙利度胺及PDTC组相比(P<0.05),差异具有统计学意义。  4、流式实验结果显示:在沙利度胺(100μg/ml)联合PDTC(10uM/L)、沙利度胺(100μg/ml)及PDTC(10uM/L)作用48小时后,沙利度胺联合PDTC组细胞凋亡率增高,相比沙利度胺及PDTC组(P<0.05),差异具有统计学意义。  5、westernblot实验结果显示:在沙利度胺(100μg/ml)联合PDTC(10uM/L)、沙利度胺(100μg/ml)及PDTC(10uM/L)作用48h后,沙利度胺联合PDTC组HepG2细胞中NF-KB、OPN表达量明显降低,与沙利度胺及PDTC组相比(P<0.05),差异具有统计学意义。  结论:⑴、沙利度胺联合PDTC较单用沙利度胺或PDTC可能更好的抑制HepG2细胞迁移与侵袭。⑵、沙利度胺可能通过抑制NF-kB途径,下调OPN的表达从而影响HepG2细胞的迁移与侵袭作用。
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