目的:建立一套可靠的鼠肺成纤维细胞分离、纯化和培养技术,并研究鼠肺成纤维细胞在细胞外基质支架中的生长特性,进而为体外研究间质性肺病的发病机制及治疗提供一种新的方法。方法:1、采用胰酶消化出生后2 d SD大鼠肺组织块,经差时贴壁法,分离、纯化鼠肺成纤维细胞,并进行原代培养。用波形蛋白免疫荧光染色、扫描电镜和蛋白质印迹法对所分离、纯化的细胞进行鉴定,并绘制其生长曲线。2、将纤维蛋白原、层粘连蛋白和纤粘连蛋白按一定比例混合后,在新鲜大鼠血浆促凝作用下,构建单层毯状细胞外基质支架。将原代培养并纯化传代的鼠肺成纤维细胞分别植入支架及加入转化生长因子-β₁的支架,应用倒置显微镜、免疫荧光、扫描电镜、MTT法、Real-time PCR和免疫印迹方法观察鼠肺成纤维细胞在三维培养中的生长特性。结果:1、该方法所得细胞产量大、纯度高。鼠肺成纤维细胞免疫荧光染色波形蛋白阳性。扫描电镜观察可见细胞有微绒毛,细胞间连接成网状。免疫印迹检测显示波形蛋白表达。生长曲线提示细胞增殖稳定。2、鼠肺成纤维细胞在细胞外基质支架及加入转化生长因子β₁的支架中细胞增殖、转化及Ⅰ型胶原、MMP-2、TGF-β₁合成能力均明显强于普通单层培养。结论:1、该方法是一种可靠的鼠肺成纤维细胞分离纯化培养技术。2、鼠肺成纤维细胞在细胞外基质支架中有良好的生长特性,为体外研究成纤维细胞在肺间质纤维化中的作用提供了一种新的方法。