不同条件CO2气腹手术对裸鼠卵巢癌种植转移的影响及其机制的研究

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目的:通过建立离体模拟的不同条件腹腔镜二氧化碳(CO2)气腹的手术环境以研究离体环境CO2气腹环境本身对人卵巢腺癌细胞株(SKOV3)细胞生长增殖的影响,从而对腹腔镜用于在体卵巢癌手术的安全性作出初步评价。方法:1、建立离体环境腹腔镜CO2气腹模型。实验分5组:空白对照组、开腹对照组、恒压3mmHg气腹手术组、恒压8mmHg气腹手术组、脉冲8mmHg气腹手术组。每组干预2小时。2、Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒法检测离体环境不同条件CO2气腹对卵巢癌细胞生长增殖的影响。3、实时荧光定量聚合酶链反应(Real Time-PCR)法检测离体环境不同条件CO2气腹对卵巢癌细胞中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、黏附分子CD44变异体6(CD44v6)及E钙黏连蛋白(E-cad)的基因信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。结果:1、离体腹腔镜CO2气腹环境和开腹环境对卵巢癌SKOV3细胞增殖生长都有一定的抑制作用,而且随着压力的升高,其抑制作用越明显。虽然低气压(3mmHg)气腹组比开腹组对离体卵巢癌细胞生长增殖影响更小,但无明显统计学意义(P>0.05)。两种气腹机对离体卵巢癌细胞生长增殖的影响也无明显统计学意义(P>0.05)。2、离体腹腔镜CO2气腹环境和开腹环境对卵巢癌SKOV3细胞VEGF-C、CD44v6及E-cad基因mRNA表达都有一定的抑制作用,而且随着压力的升高,其抑制作用越明显。虽然低气压(3mmHg)气腹组比开腹组对离体卵巢癌细胞生长增殖影响更小,但无明显统计学意义(P>0.05)。脉冲气腹机对离体卵巢癌细胞VEGF-C、CD44v6及E-cad基因表达的抑制作用更大,具有明显统计学意义(P<0.05)。结论:CO2气腹环境本身对卵巢癌细胞生长增殖无促进作用,可进一步用于在体实验研究。目的:以人源卵巢癌细胞构建裸鼠卵巢癌动物模型。予荷瘤裸鼠行不同条件的腹腔镜CO2气腹干预,观察描绘荷瘤裸鼠生存曲线,并与开腹组对照,进一步研究探讨腹腔镜不同CO2气腹条件对卵巢癌预后的影响。方法:1、通过腹腔注射稳定传代的人源SKOV3细胞建立在体的裸鼠卵巢癌模型。2、Real Time-PCR内参法检测移植接种的肿瘤遗传学种属特点。3、将30只裸鼠随机分为5组:空白对照组、开腹对照组、恒压3mmHg气腹手术组、恒压8mmHg气腹手术组、脉冲8mmHg气腹手术组,每组6只。各实验组干预时间为1h;对照组不经气腹处理。干预后继续在无特定病原体环境(SPF级)自然饲养直至死亡。结果:1、本次实验裸鼠卵巢癌模型造模成功,模型具备实体瘤和腹水瘤两者的特点。2、移植接种的裸鼠实体瘤和腹水瘤均为鼠源肿瘤。3、开腹组及不同条件CO2气腹组对卵巢癌预后均存在不良影响,而且随着压力增高,这种影响更大。但开腹与低气压(3mmHg)气腹组之间无明显差异。在高气腹压力情况下(8mmHg),脉冲气腹机比恒压气腹机对卵巢预后影响更大。结论:开腹(开关术、无减瘤操作)及气腹干预(无减瘤操作)对卵巢癌预后均存在不良影响,而且随着压力增高,这种影响更大。但开腹与低气压(3mmHg)气腹组之间无明显差异。在高气腹压力情况下(8mmHg),脉冲气腹机比恒压气腹机对卵巢预后影响更大。目的:在构建裸鼠卵巢癌动物模型后,予荷瘤裸鼠行不同条件的腹腔镜CO2气腹干预,通过Real Time-PCR法和ELISA法研究在体气腹环境对卵巢癌组织基因VEGF-C、CD44v6和E-cad表达的mRNA和蛋白的相对情况;通过显微电镜了解腹腔镜气腹对腹膜局部的超微结构影响改变。并与开腹组对照,进一步研究探讨腹腔镜不同CO2气腹条件对卵巢癌预后影响的机制方法:1、Real time PCR法检测不同条件CO2气腹对裸鼠卵巢癌组织中VEGF-C、CD44v6及E-cad基因mRNA表达的影响2、酶联免疫法(ELISA)检测不同条件CO2气腹干预术前与术后7天裸鼠卵巢癌腹水中VEGF-C、CD44v6及E-cad蛋白含量的变化。3、透射电镜法观察不同条件CO2气腹对裸鼠腹膜超微结构的影响结果:1、腹腔镜CO2气腹和开腹使卵巢癌SKOV3细胞VEGF-C和CD44v6的表达上调,但干预各组间无明显统计学意义(P>0.05);使E-cad的表达下调,但干预各组间无明显统计学意义(P>0.05)。2、与对照组比较,开腹以及不同CO2气腹条件对组织中VEGF-C、CD44v6及E-cad蛋白表达的改变(术后7天与术前表达改变)无明显统计学意义(P>0.05)。3、CO2气腹对腹膜间皮细胞存在不可逆的损害,这种损害随着压力的升高而加重。脉冲气腹组的损害最为严重,内皮细胞形态不完整,崩解断裂多见,细胞间隙巨大,微绒毛断裂。各层均可见到大量肿瘤细胞浸润。结论:与传统开腹手术相比,目前没有证据表明CO2气腹手术对卵巢癌细胞种植转移的生物学特性存在影响。但CO2气腹压力过高可能导致腹膜间皮细胞及基底细胞受损,从而降低了腹膜的防御能力。
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