背景脑缺血后若能及时在再灌注时间窗内恢复半暗带区的血氧供应，可以挽救神经元生理功能，改善患者预后。然而，随着缺血区血液供应的恢复，也可能导致进一步的组织损伤和功能障碍，即缺血再灌注损伤。因此，如何减轻脑缺血再灌注损伤成为目前缺血性脑血管病治疗的关键环节。最近研究表明，缺血缺氧后，脑组织可上调细胞内信号转导通路的表达，启动自身性血管生成机制，逐渐建立起自身侧支循环，以适应或抵抗脑局部缺血缺氧，减轻再灌注损伤。缺血性脑卒中后参与血管生成的胞内信号转导通路较多且机制较为复杂，其中PI3K/Akt信号转导通路与脑部缺血半暗带区微血管生成和侧枝循环的建立密切相关，其信号效应分子的表达，受细胞内外多种因素的调节，从而在疾病的发生发展过程中发挥重要作用。然而这种内源性的血管生成机制，不足以代偿缺血区的血氧供应，需药物干预的手段促进血管生成，这就为中药作用于血管新生及信号通路的研究，提供了广阔的前景。本课题在前期研究的基础上，从模型大鼠缺血区和半暗带α-SMA、PI3K、Akt1的表达变化来探讨老龄大鼠脑缺血/再灌注后微血管生成的特点及中药制剂对老龄大鼠脑缺血/再灌注微血管生成的影响及可能的作用机制，这对深入探讨老年缺血性脑血管疾病的病理生理特点，探索中医药治疗缺血性脑血管疾病的作用途径，具有重大的社会意义及科学价值。目的1通过观察青年模型组、老龄模型组、尼莫地平组、脑脉通组大鼠脑缺血（I）3h再灌注（I/R）24h、3d、6d、12d后脑组织损伤的病理变化，揭示老龄大鼠脑I/R损伤的特点及脑脉通对其的脑保护作用；2通过研究青年模型组、老龄模型组、尼莫地平组、脑脉通组大鼠脑缺血（I）3h再灌注（I/R）24h、3d、6d、12d大脑皮质区半暗带微血管α-SMA表达变化，揭示老龄大鼠I/R脑微血管生成的特点及脑脉通对其影响；3通过研究青年模型组、老龄模型组、尼莫地平组、脑脉通组大鼠脑缺血（I）3h再灌注（I/R）24h、3d、6d、12d大脑皮质区半暗带PI3K、Akt1表达变化，揭示老龄大鼠I/R微血管生成的可能机制及脑脉通对其影响。方法1采用MCA线栓法制备大鼠局灶性脑缺血（I）3h再灌注（I/R）24h、3d、6d、12d动物模型，通过光镜等技术观察各组大鼠在脑I/R后不同时间点大脑皮质脑组织损伤的病理特点，进一步探讨脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织病理改变的影响。2采用MCA线栓法制备大鼠局灶性脑缺血（I）3h再灌注（I/R）24h、3d、6d、12d动物模型，运用免疫组织化学方法比较各组大鼠在I3h、I/R1d、I/R3d、I/R6d、I/R12d后大脑皮质区半暗带微血管α-SMA的表达变化，研究脑脉通对老龄大鼠缺血再灌注后微血管α-SMA表达变化的影响。3采用MCA线栓法制备大鼠局灶性脑缺血（I）3h再灌注（I/R）24h、3d、6d、12d动物模型，运用免疫组织化学方法比较各组大鼠脑缺血3h再灌注1d、3d、6d、12d后大脑皮质区半暗带PI3K、Akt1表达变化，研究脑脉通对老龄大鼠缺血再灌注后脑组织PI3K、Akt1表达的影响。结果1老龄大鼠I/R脑组织损伤的病理观察及脑脉通对其的影响通过常规HE染色，光镜下观察模型组大脑皮质缺血中心区与半暗带区脑组织损伤的病理变化发现，在I3h开始出现组织水肿；I/R24h、I/R3d天时水肿程度较严重，神经纤维紊乱，血管间隙增宽；I/R6d时水肿达到高峰，同时可见大量神经细胞、胶质细胞变性坏死，微血管壁破坏；I/R12d时水肿基本消失，神经元、胶质细胞、神经纤维减少，坏死液化灶出现。与青年模型组相同时间点比较，老龄模型水肿出现早，组损伤较严重，恢复速度较慢；与老龄模型组相同时间点相比，脑脉通组和尼莫地平组病理组织损伤较轻。2老龄大鼠脑I/R α-SMA蛋白表达时程变化及脑脉通对其表达的影响通过免疫组化结果发现：青年和老龄假手术组均可见α-SMA弱阳性表达；青年模型组I24h阳性表达开始上升，随着I/R时间点的变化，阳性表达呈上升趋势，I/R6d、12d维持在较高水平；与青年模型组比较，老龄模型组I3h、I/R24h、I/R3d、I/R12d表达均低于青年模型组（P<0.05，P<0.01）；与老龄模型组同时间点比较，脑脉通组和尼莫地平组α-SMA阳性表达均高于老龄模型组（P<0.05）。3老龄大鼠脑I/R PI3K、Akt1蛋白表达时程变化及脑脉通对其表达的影响通过免疫组化结果发现：青年和老龄假手术组均可见PI3K弱阳性表达；青年模型组I24h阳性表达开始上升，随着I/R时间点的变化，阳性表达呈上升趋势，I/R6d达到峰值，I/R12d呈降低趋势；与青年模型组相同时间点比较，老龄模型组阳性表达均较低（P<0.05）；与老龄模型组相同时间点比较，脑脉通组和尼莫地平组各时间点PI3K阳性表达均高于老龄模型组（P<0.01）。青年和老龄假手术组均可见Akt1弱阳性表达；青年模型组I24h阳性表达开始上升，随着I/R时间点的变化，阳性表达呈上升趋势，I/R6d达到峰值，I/R12d呈降低趋势；与青年模型组相同时间点比较，老龄模型组Akt1阳性表达均较低（P<0.05）；与老龄模型组相同时间点比较，脑脉通组和尼莫地平组各时间点阳性表达均高于老龄模型组（P<0.01）；与尼莫地平组相同时间点比较，脑脉通组阳性表达高于尼莫地平组（P<0.01）。结论1.在遭受相同条件的I/R损伤时，与青年模型组相同时间点比较，老龄模型组大鼠损伤出现较早，损伤较重，恢复慢。与老龄模型组相同时间点比较，脑脉通组及尼莫地平组组织病理损伤程度较轻，尤以脑脉通组大鼠脑组织损伤程度最轻，修复最快，提示脑脉通可明显改善老龄大鼠脑I/R后组织的损伤。2.老龄大鼠脑I/R损伤后，脑组织内可见微血管生成标记物α-SMA蛋白的表达，且随脑I/R时间的延长，表达逐渐增多；与老龄模型组相同时间点比较，脑脉通组及尼莫地平组α-SMA蛋白的表达水平增高，尤以脑脉通组显著，提示脑脉通促进老龄大鼠脑I/R后微血管生成。3.老龄大鼠脑I/R损伤后，脑组织内有PI3K、Akt1信号效应分子表达，提示在脑I/R早期即激活了PI3K/Akt1信号转导通路，调节缺血再灌注损伤；与老龄模型组相同时间点比较，脑脉通及尼莫地平组蛋白表达水平均增高，尤以脑脉通组显著，提示脑脉通对老龄大鼠脑I/R后损伤的保护机制可能与提高缺血半暗带区PI3K、Akt1信号效应分子表达，调节PI3K/Akt1信号转导通路，促进血管生成有关。